医学实验小技巧与知识总结.pptVIP

生物学小知识 制作人：郜原 * OD (optical density，吸光度) OD260/OD280来判断分子纯度 当OD260/OD280 1.8，表示蛋白质含量较高 当OD260/OD280 2.0，表示RNA含量较高 当OD260/OD280=1.8～2.0，表示DNA较纯 OD260/OD230 的比值来判断所得到的核酸中的盐和小分子杂质的残留程度 对于核酸纯制品，OD260/OD230应大于2； OD260/OD2302说明去盐不充分 用于细胞转染的质粒大提浓度最好能达到300ng/μL以上 * 碱基平均分子量324.5。 合成公司交给你的引物成品一般是会注明有几个OD，正常情况下1个OD相当于33μg 。 * Tm值的简单计算 * 蛋白分子量估算 N(氨基酸数量) ×110 Da * 增加PCR特异性 镁离子浓度 镁离子影响PCR的多个方面，如DNA聚合酶的活性，引物退火，影响PCR产量和特异性。dNTP和模板同镁离子结合，降低了酶活性所需要的游离镁离子的量。最佳的镁离子浓度对于不同的引物对和模板都不同，但是包含200μM dNTP的典型PCR起始浓度是1.5mM（注意：对实时定量PCR，使用3到5mM带有荧光探针的镁离子溶液）。较高的游离镁离子浓度可以增加产量，但也会增加非特异性扩增，降低忠实性。为了确定最佳浓度，从1mM到3mM，以0.5mM递增，进