第五章 种子制备(90min)-改后.pptVIP

第五章 种子制备 概念 种子制备就是将保存在沙土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种的过程。这些纯种培养物称为种子。 第一节 概述 一、种子扩大培养的目的 1.为每次发酵罐的投料提供一定数量代谢旺盛的种子。 2.缩短发酵时间，提高发酵罐利用率，同时也减少染菌机会 二、优质种子必须具备的条件 ①菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短； ②生理性状稳定，以得到稳定的菌体生长过程； ③具有适宜的菌体总量及浓度，满足大容量发酵的要求； ④无杂菌污染， ⑤保持稳定的生产能力，使最终产物的生物合成量持续、稳定、高产。 生产菌种质量的检测标准 1.无菌试验及显微镜镜检观察有无杂菌 2.生化测定。糖、氮、pH、菌体浓度等代谢指标是否合格。 3.菌丝形态，菌丝浓度，培养液外观（色泽、气味、浑浊度、 颗粒等）。 4.产物指标，酶活等。 三、种子扩大培养的工艺流程 酵母菌种子的制备 1. 啤酒 crop ，pitch （1）传统敞口上面发酵：top fermentations ‘middle skimmings’ ，treatments （2）锥形罐发酵 酵母活力不高，罐底环境，低温，厌氧保存 Sterols 甾醇 与氧 ，麦汁通风，酵母通风 （3）Active dry yeast (ADY) , 2.面包酵母 细菌种子制备-丙酮丁醇梭菌种子制备 棒酸clavulanic acid生产菌Streptomyces clauuligerus （棒酸链霉菌）种子制备 固化培养基（琼脂培养基）产孢 固体培养基产孢 谷类作物 大麦，玉米，大米，小米，麦麸等 比表面积大，孢子量多，湿度控制 浸没培养产孢 四、种子扩大培养的方法 1.孢子进罐法： 以孢子形式的种子直接进罐的方法 先在固体培养基上生长繁殖成大量孢子，将孢子直接接入种子罐扩大培养。 优点：一次可以制备较大量的孢子，易于保存。既可以节省大量的人力、物力和时间，又可减少杂菌污染的机会。 缺点：砂土管或冷冻管的用量大。 2.摇瓶菌丝进罐法 将固体培养基上繁殖的孢子接入摇瓶液体培养基中，使其生长繁殖成菌丝，再将摇瓶菌丝接入种子罐扩大培养； 优点： 节省砂土管或冷冻管的用量，缩短菌种在种子罐内的生长时间。 缺点：菌丝不易保存，批次更换频繁，批与批之间的种子质量有差异，容易造成生产上的波动；由于菌丝制备工艺时间长，增加了杂菌污染的机会。 第二节 工业发酵种子的制备 一、实验室种子制备 二、生产车间种子制备 放线菌孢子的制备 1.培养基与培养条件 （1）琼脂，和其他营养成分如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨、牛肉膏和一些无机盐等，碳源和氮源不要太丰富，碳氮比例大一些为好，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子的形成。 （2）多为28℃，部分为30℃或37℃。一般在4～7d，也有的为14d左右。 2.流程 霉菌孢子的制备 1.培养基与培养条件 （1）多数采用大米、小米、玉米、麦麸等天然农产品，来源丰富 ，适合霉菌的生长繁殖，表面积较大 。制备大（小）米培养基，严格控制含水量，使其不粘不散。 （2）25℃～28℃，培养时间随菌种而不同，一般为4～14d。为了使通气均匀，要注意翻动。 2.流程 细菌孢子的制备 1.培养基与培养条件 （1）采用碳源限量而氮源丰富的配方。牛肉膏、蛋白胨是常用的有机氮源。 （2）细菌培养温度大多数为37℃，少数为28℃。细菌菌体培养时间一般为1～2d，产芽孢的细菌则需培养5～10d。 2.流程 影响种子质量的因素 1.原材料质量 麸皮，大（小）米；蛋白胨等，主要是无机离子含量不同。 2.培养温度 对多数微生物的斜面孢子质量有显著影响 龟裂链霉菌斜面，最适温度为36.5℃～37℃；温度高于37℃，则孢子成熟早、易老化 3.湿度 斜面孢子培养基的湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。 4.通风与搅拌 种子罐中 5.培养时间和冷藏时间 衰老的孢子不如年轻的孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，物质趋于分化状态。 土霉素菌种斜面培养4.5d，孢子尚未完全成熟，冷藏7～8d菌丝即开始自溶；培养5d，孢子完全成熟，冷藏20d也不会自溶 第三节 种子制备过程举例 2.薯干粉 成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 薯干粉 1