0实验一微生物培养基的配制灭菌及纯培养-公开课件（精选）.ppt

实 验 一 微生物培养基的配制和灭菌及纯培养 一、微生物培养基的配制和灭菌（不做） 目的要求 实验材料 实验程序 1、目 的 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 2、材 料 和 器 皿 主要药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、营养琼脂等。 仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、紫外线杀菌灯。 其它：天平、药匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、三角烧瓶、量筒、玻棒、试管、培养皿、吸管、牛皮纸、纱绳、硅胶塞、标签等。 3、方法和步骤 培养基的配制 培养基和玻璃器材的灭菌方法 培养基的概念及种类 培养基的配方、配制步骤 培养基 是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。 培养基的种类 按照培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 （2）培养基和玻璃器材的灭菌方法 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。 本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。P.90 二、 微生物的纯培养（微生物的培养特征） 1、实验目的 1）掌握常用的分离纯化微生物的基本操作技术： 平板划线法； 2）掌握微生物无菌操作技术； 3）熟悉不同微生物在固体斜面、半固体和液体培养基上的生长特征。 2、实验原理 1） 微生物在自然界中无处不在，尤其在土壤中存在极其丰富。但自然界中的微生物都以混杂状态存在。要研究某种微生物的性质，首先要获得这种微生物的纯培养物。 2）在固体平板、固体斜面、半固体和液体培养基上，不同的微生物有其固有的培养特征。这些培养特征可以作为微生物分类鉴定的指标。 今天接种的菌种： 枯草杆菌 　　 芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。  大肠杆菌 需氧及兼性厌氧。G－短杆菌，周鞭毛，有动力，周身有菌毛。 变形杆菌 为革兰氏染色阴性、无芽胞、无荚膜、周身鞭毛、运动活泼、两端钝圆的小杆菌。兼性厌氧。有些种在普通固体培养基上菌落呈迁徙生长。 在自然界中存在极广，水、泥土、阴沟及各种腐败的动、植物中最多，也存在于健康人和动物的肠道中。它们是条件致病菌，在特殊情况下对人致病，如食物中毒、尿路感染、夏季腹泻或其他混合感染。  葡萄球菌 是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。在液体培养基的幼期培养中，常常分散，细菌细胞单独存在。代表种有金黄色葡萄球菌（S-taphylococcusaureus）（黄色）、白色葡萄球菌（S．albus）（白色）、柠檬色葡萄球菌（S．citreus）（橙色）。 葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。 在肉汤培养基中24小时后呈均匀混浊生长，在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。不同种的菌标产生不同的色素，如金黄色、白色、柠檬色。 3、实验操作 （1）接种 每组每人固体平板、试管斜面、半固体、液体培养基各1个。 每组1人接种枯草杆菌，1人接种大肠杆菌，1人接种变形杆菌，1人接种白色葡萄球菌。 写上自己的班级、学号、菌名。 平板接种方法参阅p.129； 斜面接种方法参阅p.8； 液体接种方法参阅p.99； 半固体接种参阅P.49。 （2）培养特征观察 于37℃下培养24h后观察各种菌株在不同的培养基上的培养特征，比较它们培养特征之间的差异。 平板培养特征的描述参阅p.18表2，斜面培养特征参阅P.9，液体培养特征的描述参阅P.100，半固体培养特征的描述参阅P.49-50。 明天中午12:30观