第六章蛋白质工程.pptVIP

　　 你知道人类基因组计划吗? 由美国科学家于1985年率先提出，于1990年正式启动的。美国、英国、法兰西共和国、德意志联邦共和国、日本和我国科学家共同参与了这一计划。2000年完成了人类基因组“工作框架图”。2001年公布了人类基因组图谱及初步分析结果。 它是指对人类基因组进行碱基对的测序。 因为人类体细胞中有22对常染色体，每对染色体中的两个DNA分子结构基本相同，又由于X和Y这两个性染色体中DNA分子结构有较大差异，需要各自单独测序；所以对人类基因组测序实际上是指对人类体细胞中一套常染色体（22个）和X、Y这两个性染色体中共24个DNA分子的测序。 你知道国际人类蛋白质组计划吗？ 第六章 蛋白质工程 第一节 蛋白质工程概述 一、蛋白质工程的概念 蛋白质工程（protein engineering)，是指通过生物技术对蛋白质的分子结构或者对编码蛋白质的基因进行改造，以便获得更适合人类需要的蛋白质产品的技术。 是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。 二、蛋白质工程的基本原理 蛋白质工程是研究蛋白质的结构及结构与功能的关系，然后人为地设计一个新蛋白质，并按这个设计的蛋白质结构去改变其基因结构，从而产生新的蛋白质或者从蛋白质结构与功能的关系出发，定向地改造天然蛋白质的结构，特别是对功能基因的修饰，也可以制造新型的蛋白质。 二、蛋白质工程的基本原理 基因工程与蛋白质工程的区别： 基因工程通过分离目的基因重组DNA分子，使目的基因更换宿主得以异体表达，从而创造新类型，但这只能合成自然界固有的蛋白质。 蛋白质工程则是运用基因工程的DNA重组技术，将克隆后的基因编码序列加以改造，或者人工合成新的基因，再将上述基因通过载体引入适宜的宿主系统内加以表达，从而产生数量几乎不受限制、有特定性能的“突变型”蛋白质分子，甚至全新的蛋白质分子。 三、蛋白质工程的研究内容 蛋白质工程4大类研究： 1、利用已知的蛋白质一级结构的信息开发应用研究。 2、定量确定蛋白质结构-功能关系。包括蛋白质三维结构模型的建立，酶催化性质、蛋白质折叠和稳定性研究、蛋白质变异的探讨等。 3、从混杂变异体库中筛选出具有特定结构-功能关系的蛋白质。 4、根据已知结构-功能关系的蛋白质，用人工方法合成它及其变异体，完全人为控制蛋白质的性质。 三、蛋白质工程的研究内容 蛋白质工程研究的具体内容： 1、通过改变蛋白质的活性部位，提高其生物功效。 2、通过改变蛋白质的组成和空间结构，提高其在极端条件下的稳定性。 3、通过改变蛋白质的遗传信息，提高其独立工作能力，不再需要辅助因子。 4、通过改变蛋白质的特性，使其便于分离纯化。 5、通过改变蛋白质的调控位点，使其与抑制剂脱离，解除反馈抑制作用。 四、蛋白质工程的研究意义 酶绝大多数是蛋白质——天然的生物酶虽然能在生物体内发挥各种功能，但在生物体外，特别是在工业条件（高温、高压、机械力、重金属离子、有机溶剂、氧化剂、极端pH等）下，则常易遭到破坏。 需要改造天然酶，使其能够适应特殊的工业过程；或设计制造出全新的人工酶或人工蛋白，以生产全新的医用药品、农业药物、工业用酶和一些天然酶不能催化的化学催化剂。 五、蛋白质工程的发展与进展 蛋白质工程是20世纪80年代处诞生的一个新兴生物技术领域。 1983年，Ulmer在“Science”上发表以“Protein Engineering‘’ (蛋白质工程)为题的专论，一般将此视为蛋白质工程诞生的标志。 当前，蛋白质工程是发展较好、较快的分子工程。这是因为在进行蛋白质分子设计后，已可应用高效的基因工程来进行蛋白的合成。最早的蛋白工程是福什特（Forsht）等在1982～1985年间对酪氨酰—t—RNA合成酶的分子改造工作。他根据XRD（X射线衍射）实测该酶与底物结合部位结构，用定位突变技术改变与底物结合的氨基酸残基，并用动力学方法测量所得变体酶的活性，深入探讨了酶与底物的作用机制。 佩里（Perry）1984年通过将溶菌酶中Ile(3)改成Cys(3)，并进一步氧化生成 Cys(3)-Cys（97）二硫键，使酶热稳定性提高，显著改进了这种食品工业用酶的应用价值。 1987年福什特通过将枯草杆菌蛋白酶分子表面的Asp（99）和Glu（156）改成Lys，而导致了活性中心His（64）质子pKa从7下降到6，使酶在pH＝6时的活力提高10倍。 1988年杜邦公司宣布，成功设计并合成了由四段反平行α-螺旋组成为73个氨基残基的成果。这显示，按人们预期要求，通过从头设计以折叠成新蛋白的目标已是可望又可及了。 这显示，按人们预期要求，通过从头设计以折叠成新蛋白的目标已是可望又可及了。预测结构的模型法，在奠定分子生物学基础时起过重大作用。