细菌的荚膜染色.ppt

实验六 细菌的荚膜染色法 * PPT课件 实验的目的要求 学习并掌握荚膜染色法 * PPT课件 荚膜染色的基本原理 荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。 由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色(负染色法),使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。 也可采用Anthony氏染色法，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分。 * PPT课件 实验材料 菌种 胶质芽孢杆菌 试剂 绘图墨水 1%甲基紫水溶液 6%葡萄糖水溶液 20%硫酸铜水溶液 甲醇 香柏油 二甲苯 仪器和用具 载玻片 盖玻片 滤纸 显微镜 镜头纸 * PPT课件 方法 湿墨水法 干墨水法(P78) Anthony氏法(P79) * PPT课件 湿墨水法 制备细菌墨水混合液 加盖玻片 镜检 * PPT课件 制备细菌墨水混合液 1、滴绘图墨水 2、制备混合液 绘图墨水 滴1滴绘图墨水在载玻 片中央 挑取少量菌苔 与墨水混 合均匀涂布 * PPT课件 加盖玻片 在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液 1、加盖玻片 将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片 2、吸去多余液体 勿留气泡 * PPT课件 镜检 1、镜检 用低倍镜高倍镜观察 制片置显微镜载物台上 2、结果： 背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。 * PPT课件 干墨水法 制备细菌墨水混合液 涂片 固定 染色 镜检 * PPT课件 制备细菌墨水混合液 1、滴葡萄糖溶液 2、涂片 6%葡萄糖 在载玻片一 端 滴一滴6% 葡萄糖水 挑取少量菌苔 混匀后再加一环墨水，再次混匀 * PPT课件 涂片 1、先将推片一 端放在混合液上 2、将推片向另 一端平行滑动 3、使混合液 均匀铺成薄层 4、干燥 室温自然晾干 * PPT课件 固定、干燥 甲醇固定，自然干燥 甲醇 滴甲醇浸没涂片1分钟 倾去甲醇，室温自然干燥 注意：固定及干燥均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形。 同时，菌体失水收缩，会与周围染料脱离产生透明区，导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜。 * PPT课件 染色 1、滴甲基紫染液 2、水洗 不要直接冲菌膜 甲基紫染液 甲基紫染液染色1-2分钟 3、自然干燥 * PPT课件 镜检 1、镜检 用低倍镜高倍镜观察 制片置显微镜载物台上 2、结果： 背景灰黑色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。 * PPT课件 Anthony氏法 制片 固定 染色 镜检 * PPT课件