核医学第2章体外分析.pptVIP

三、RIA与IRMA的比较 RIA IRMA 标记物 抗原 抗体 原理 竞争性结合 非竞争性 结合 抗体量 限量 过量 标准曲线 负相关 正相关 达到平衡的速度 慢 快 可测范围 窄 宽 应用对象 大分子、小分子 大分子 非放射性标记免疫技术 一、酶标记免疫分析技术 酶联免疫吸附分析法（ELISA） 二、化学发光分析法 化学发应释放自由能，激发态， 退击释放光子 三、时间荧光免疫分析 四、RIA 与非放射性标记免疫分析法的比较 体外标记免疫分析的临床应用 一、蛋白质和肽类激素 二、病原体抗原 三、肿瘤标记物 选择=结果 汇报结束 谢谢观看！ 欢迎提出您的宝贵意见！ 第2章 体外分析技术 概 述 20世纪60年代,Berson和yalow,放射免疫分析(RIA),诺贝尔奖. 20世纪70年代,Engvall和Wecman,酶标记免疫分析(EIA) 80年代时间分辨荧光免役分析(TRFIA) 化学发光免役分析(CLIA) 电化学发光免役分析(ECLIA) 微粒体发光免役分析(MLEIA) 放射免疫分析 一、原理 Ag+Ab AgAb+Ag + *Ag *Ag+*AgAb 二、试剂盒 （一）抗体(结合剂）：高亲和力、高特异性、高滴度 （二）标记抗原 125I,放化纯，长半衰期，标记后不改变抗原活性。 （三）标准品 与被测物为同一物质，定量精确，放化纯高 （四）B与F 分离技术 （五）放射性测量仪 实验操作步骤 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Ag 0ng/ml 0.1ml 5ng/ml 0.1ml 10ng/ml 0.1ml 20ng/ml 0.1ml 40ng/ml 0.1ml 80ng/ml 0.1ml 1 2 3 4 5 6 7 8 Ag 0ng/ml 0.1ml 5ng/ml 0.1ml 10ng/ml 0.1ml 20ng/ml 0.1ml 40ng/ml 0.1ml 80ng/ml 0.1ml 待测1 0.1ml 待测2 0.1ml *Ag 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml Ab 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 摇均匀后，放置待其竞争结合反应达平衡后 分离试剂 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 测总射线（可以测2-3管求均值） 去除上清液测B；也可求出F 画出标准曲线 从标准曲线查出待测品的Ag含量 1. 配制一系列已知浓度的标准抗  原Ag的反应管，并标明浓度；2.分别向反应管中加入固定量的  *Ag、Ab；3.经过一定时间的温育竞争结合 反应； 4.待竞争结合反应平衡后，分 离结合B（Bond）部分和游  离F(Free)部分；5.用放射性探测器测得*Ag-Ab 放射性为B或游离*Ag的放射 性为F； 6.计算出结合率B%[B/（B+F）×100]， 或B/B0%；B0为不含Ag的结合率，因Ag 为“0”，故B0 *Ag-Ab的结合率为最大结合率； 7.以B%或B/B0为纵坐标，标准抗原 浓度为横坐标，绘制出B%或B/B0 随Ag量变化的曲线即为标准曲线。 60 8.在相同条件下，测得被测样品Ag的B%或样品/B0%的浓度与标准曲线对照，即可查出被测样品Ag的浓度。 三、分离方法