不同感染状态下EB病毒核抗原亚型表达研究.PDFVIP

维普资讯 一 f7 争 ／’ 第9卷 第 1期 中 国 癀 毒 学 vd．9 No．1 1994年 3月 V ／ROL~ ICA SINICA M Ⅱ． 199{ 不同感染状态下EB病毒核抗原亚型表达的研究 詹 德 进 ‘ (广州医学院化学致癌研究所 ．广州 5101821 陈 剑 经 R (中山医科大学肿窟研究所 ．广州 5100B0) 提要 本实验用免疫印迹法纯化的抗EBNA亚型抗体，结合显徽荧光分光光度检测技术-捡测在 不同感染状态下．三种亚型Ⅱ 抗原在细胞中的表达程度．结果表明，处于潜伏感染状态下的Raj 细胞EBNA-I表达量较大 ，经巴豆油和正丁酸诱导进入钝挫感染状态后I~NA-I表达瞒少 ，而 EBNA-2的表达增强． 细胞也有相似的趋势．表明EB病毒的激活可能与不同凼 A亚型表达量 的改变有关． I ， 抗原定量 、 关键调 癌i眩越匾，．苎墨堕 抗体纯化 早期的研究显东D3，EBV潜伏性感染细胞(如 la且细胞)．在诱癌剂佛波醇 (TPA)和化学诱 导剂正丁酸的作用下 ，可进入钝挫感染状态 ．细胞在早期抗原表达的同时，伴有核抗原 (EBN A)表达量的变化。最近的研究表 明∞，TPA通过诱导细胞合成抗 ~NA-I蛋白，使EBV激活 ， 进入产病毒循环 。本实验利用免疫印迹法纯化制备的抗EBNA亚型抗体 ，结合显微荧光分光光 度定量技术，检测在不同感染状态下 ，细胞中三种亚型EBNA抗原的表达程度 ，以了解EBNA 亚型与EBV激活之 问的关系。 材料与方法 I 纽孢 Raj、PIHR-I细胞和B 细胞均带有 口v基因，CNE2细胞不带有 口v基因 ．4抹细胞均用含 l0 小牛血清的1640培养基培养．曲v的激活是在细胞培养 24小时后，培养基内加入终浓度为蚰q坦／ 巴豆油 和 4mmol／L正丁酸 ．再培养蚰 小时后收获． 2 血i膏 抗 曲NA阳性血清的抗EBNA滴度 I；640．阴性对照血清的抗EBNA滴度为1；5． 1 免疫印遵及抗EBNA亚型抗体的翻备 正常培养的Raii细胞收获后，参照Strnad(日和P,hod6玎的方法制备 电泳样品．电泳采用SDS，分离腔浓度为7，5 ．刳各电泳的上样量为相当于8×l 个Ra正细胞的样品． 电泳后，用电印违法把蛋白质转 印到硝酸纤维索膜(NC膜)上，经封闭液(古6 脱脂牛奶，1 SDS的礴酸缓冲 液)封闭l ，在NC膜的—侧垂直切下约Icm宽的长条 ，与抗 曲NA阳性血清作间接免疫荧光反应．第=抗体 为FITC标记的羊抗^IBG抗体。在中短波紫外线照射下观察反应结果．以此确定了各种E~3NA亚型的分布位 置后，把余下NC膜中含同一亚型EBNA的区段水平切下．这些NC膜与抗EBNA阳性血清 37C孵育30r后-用 酸性洗脱液 (nIn~ ／L甘氨酸一HCI，0142．2、20reotol／L Ac、60mn~／LKCI、1 脱脂牛奶)把吸附的抗体从NC 膜上洗脱下来．立即用 INNaOH中和至pH7．O～7．5，经低温真空干燥浓缩． 本文于 】093年 1月 11日收到．8月l6日修回 ·现在进讯地址 Dr，2 jiIl，HFI-i]0，N 。 for下啦d蝴 lR群 岫 ． 3900NCTR drive 时啪 ．AR．72079U．S A 维普资讯 中 国 病 毒 学