融合蛋白表达实验报告.docxVIP

基因构建与表达实验报告 实验一 目的基因扩增与纯化回收 一、聚合酶链式反应 实验目的：通过PCR反应将目的片段扩增出来，获得足量的目的片段。 实验原理：DNA双螺旋在90-95℃解链形成单链；50-55℃引物与单链结合；70-72℃TaqDNA聚合酶从结合在模板上的引物出发，以dNTP为原料，按碱基配对方式，从5’—3’方向合成新的DNA链。经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2的n次方倍。 实验仪器和材料：PCR仪 PCR管 移液器 tip枪头 实验试剂： 双蒸水（ddH2O） 10×PCR缓冲液(含Mg2＋) 4种10×dNTP 混合 Taq酶（Easy Taq） DNA模板 两种引物（上游和下游） 实验步骤： 配制PCR反应体系 试剂 ddH2O Easy Taq Buffer dNTP Easy Taq酶 甘油 上游引物 下游引物 DNA模板 100ul大体系 65 10 10 0.2 10 2 2 2 注：一般情况下先依次加入ddH2O、10×Buffer、10×dNTP、Easy Taq酶、甘油配体系分装到PCR管中（100ul/管），再加入对应的上下游引物和模板 放入PCR仪，按照实验设计的温度进行PCR，反应参数如下： (1) 94℃预变性4min； (2) 94℃变性1min； (3) 55℃退火1.5min； (4) 72