基因工程原理习题.docVIP

1、假如从一个原核生物中cloning某基因（1-2kb）， 请谈谈它的基本步骤？ ①限制性内切酶切割外源DNA和载体 ②将外 源DNA片段与载体连接 ③转化 ④筛选 2、什么叫基因工程（GeneEngineering），试从理 论和技术两个方面谈谈GeneEngineering诞生的基 础？ 基因工程：在体外将核酸分子插入病毒、质粒 或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之 参入到原来没有这类分子的宿主细胞内，而能持续 稳定地繁殖。 理论基础：近几十年来，由于受到分子生物学、 分子遗传学发展的影响，基因分子生物学的研究取 得了前所未有的进步。而这些学科的综合成就，又 为基因工程的诞生奠定了坚实的理论基础： ①在40年代确定了遗传信息的携带者，即基 因的分子载体是DNA而不是蛋白质，从而明确了遗 传的物质基础问题； ②在50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模 型和半保留复制机理，解决了基因的自我复制和传 递的问题； ③在50年代末期和60年代，相继提出了中 心法则和操纵子学说，并成功地破译了遗传密码， 从而阐明了遗传信息的流向和表达问题。 技术基础： ①60年代-70年代，限制性核酸内切酶和DNA连 接酶解决了对DNA分子进行体外的切割和连接； ②基因克隆载体的出现 ③大肠杆菌转化体系的建立 ④60年代发展的琼脂糖凝胶电泳和Southern转 移杂交技术对DNA片段的分离和检测十分有用。 3、基因克隆、基因操作、基因重组、基因工程的概 念及其相互联系。 基因克隆（Genecloning）：是指对基因进行分 离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的 基因拷贝，在技术上主要包括载体构建、大肠杆菌 遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节。 基因工程：是通过基因操作，将目的基因或DNA 片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复 制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表 达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。 基因操作：对基因进行分离、分析、改造、检 测、表达、重组和转移等操作的总称。 基因重组：不同来源DNA分子通过共价连接（磷 酸二酯键）而组合成新的DNA分子的过程。 它们的相互关系：基因工程是通过基因重组实 现的，但基因重组并不都是严格意义上的基因工程， 基因重组是基因操作范畴的概念，包括实验研究和 生物技术的基因重组事件，而基因工程则专指为实 践应用而进行的重组事件。基因操作是基因工程的 技术基础；基因克隆很多时候并不涉及遗传的改良。 4、为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然 产物？ 生物学和遗传学发展到现在无非就是向两个方 向发展，宏观和微观的，宏观发展无非就性状研究， 外观特征等，而微观方面就是像小分子方向基因， 蛋白等方面发展，而研究和链接这两方面的桥梁就 基因工程技术。 第二章分子克隆工具酶 1、限制性内切酶可划分为哪几个类型，各自有何特 点？ 根据酶的结构、作用的不同，可将限制性 内切酶分为三种类型。Ⅱ型限制性内切酶具有 高度特异性的DNA裂解点,而Ⅰ型和Ⅲ型兼有 修饰（甲基化）作用和依赖于ATP的活性，但 不能在识别序列上直接裂解DNA，故用途较少。 因此，Ⅱ型限制性内切酶是基因工程和基因诊 断中重要的工具酶，通常不特别说明的即为Ⅱ 型限制性内切酶。 2、哪些酶可用于DNA片段的末端标记？ KlenowDNA聚合酶和T4或T7DNA聚合酶在对 DNA片段进行末端补平反应或末端的置换反应时可 引入标记的核苷酸。 3、DNA聚合酶有哪些类型，各有什么活性？ ①E.coliDNApolI：5’-3’DNA聚合酶活性；5’ -3’DNA外切酶活性；3’-5’DNA外切酶活性。 心相印图文工作室整理luqiu910 2/4 ②E.coliDNApolI大片段（Klenow酶）：5′→3′ DNA聚合酶活性；3′→5′DNA外切酶活性；5’-3’ DNA外切酶活性。 ③T4噬菌体DNApol：5′→3′DNA聚合酶活性（与 Ｋlenow酶相似）；3′→5′外切酶活性（Ｋlenow 酶×200）：在无dNTP时只有该活性。（常用于填平 dsDNA的3′缩进末端及水解dsDNA的3′突出末 端。） ④T7噬菌体DNApol及测序酶：5′→3′DNA聚合 酶活性; 3′→5′外切酶活性（Ｋlenow酶× 1000）。 ⑤耐热DNA聚合酶（Taq酶）：在高温下仍具活性 的DNA聚合酶。5′→3′DNA聚合酶活性；5’-3’ DNA外切酶活性。 ⑥反转录酶（依赖于RNA的DNApol）：5’→3’DNA 聚合酶活性(需Mg 2+ ）；RNaseH活性（5’→3’及3’ →5’RNA外切核酸酶活性)； ⑦末端转移酶（terminaltransferase）（DNA修饰 酶）：不依赖于模板的DNA聚合酶，在二价阳离子存