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方法 DEPC－－结合蛋白质中的组氨酸 异硫氰酸胍－－解偶剂 RNasin－－与RNase非共价键结合 氧钒核糖核苷复合物－－RNA特异性抑制 剂，能与多种RNase结合形成过渡态类 似物 常见RNA酶的抑制剂 二、TRIzol试剂提取细胞总RNA 1）??组织标本需在预冷的碾钵中捣碎，收获1x106-5x106细 胞, 移入1.5 ml管中。 2）??加TRIzol试剂1 ml，混匀，冰浴5 mins。 3）??加氯仿0.2毫升，混匀，冰浴10 mins。 4）??4℃,10, 000g离心5 mins。 5）??仔细吸取上层水相，移入另一管中，加0.5 ml 异丙 醇，置室温10 mins。 6）? 4℃, 10, 000g离心 10mins。 7）? 加 75%乙醇1 ml混匀，充分洗涤沉淀，4℃,5,000g离 心5分钟。 8）??弃上清液，真空干燥，用200 μl DEPC水重悬，贮存于- 70℃。 步骤： 方法 一、异硫氰酸胍法制备总RNA RNA product by TRizol 28S 18S 5S 1 2 3 4 5 6 7 * * 核酸的分离和纯化 2011年3月 保证核酸一级结构的完整性 排除其它分子的污染 核酸制备总原则 1、供体的核酸分离 培养细胞，组织标本 收集细胞，样本 细胞，组织破碎 分离总DNA 分离细胞器 分离总RNA 分离细胞器DNA RNA poly(A)RNA 特异性RNA (mRNA) (miRNA) 染色体DNA(组建基因组文库) 一般步骤 2、载体DNA分离 载体DNA 感染或转染细胞（病毒型） 转化细菌细胞（质粒型） 分离病毒颗粒 培养转化细胞、收集菌体 病毒载体DNA分离与纯化 破碎细胞 质粒DNA分离与纯化 3、DNA片段的分离 DNA 限制酶切 凝胶电泳分离 特定DNA片段的回收 哺乳动物基因组DNA的制备 真核生物DNA制备 酵母DNA的制备 质粒DNA小量（大量）制备 原核生物DNA制备 原核生物基因组DNA的制备 噬菌体DNA的制备 病毒DNA的制备 常见病毒DNA的制备
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