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王靖岚 助教 ;教学目标;教学目标;教学内容; 1.适用范围;根据朗伯-比尔定律,当单色光通过一定厚度(l)的有色物质溶液时,有色物质对光的吸收程度(用吸光度A表示)与有色物质的浓度(c)成正比:A=k·c·l
其中,k是吸光系数,它是各种有色物质在一定波长下的特征常数。在分光光度法中,当条件一定时,k、l均为常数,此时,上式可写成:A=K·c
; 因此,一定条件下只要测出各不同浓度的吸光度值,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标即可绘制标准曲线。
在同样条件下,测定待测溶液的吸光度,然后从标准曲线查出其浓度。
邻菲啰啉是目前分光光度法测定铁含量的较好试剂。
水中三价铁离子用盐酸羟胺还原成亚铁离子,即可测定总铁。
; 亚铁离子在PH值3-9的条件下,与邻菲啰啉(1,10—二氮杂菲)反应,生成桔红色络合离子:
; 3.仪器及用具;①??储备液
②铁标准使用液
③(1+3)盐酸
④10%盐酸羟胺
⑤缓冲溶液
⑥0.5%邻菲啰啉水溶液; 5.步骤; (2)铁标准溶液的配制
准确移取铁标准储备液25.00ml置于100ml容量瓶中,稀释至刻度,此溶液每毫升含25.0μg 铁。
; (3)标准曲线的绘制
分别吸取 1mL 含 0.01mg 铁标准溶液 0ml, 2.0ml, 4.0ml , 6.0 ml, 8.0ml , 10.0mL 于 6 只 250mL锥形瓶,加蒸馏水至 50mL ,各瓶加 1ml(1+3)盐酸,1mL10% 盐酸羟胺溶液, 玻璃珠1-2粒。加热煮沸至溶液剩余15ml左右,冷却至室温。
; 显色15min后,用10mm比色皿,以空白对照为参比,在510nm处测量吸光度值,经过空白校正的吸光度对铁的微克数作图。; 定量转移到50ml具塞比色管中,加一小片刚果红试纸,滴加饱和乙酸钠溶液至试纸刚刚变红,加入5ml缓冲溶液、2ml0.5%邻菲啰啉水溶液,加水至标线,摇匀。; 水中总铁离子标准曲线; (3)总铁的测定
取水样 50mL 于250mL 锥形瓶中,放入 1 小片刚果红试纸,加1ml(1+3) 盐酸溶液, 加 1mL 10% 盐酸羟胺溶液 ,摇匀,加热煮沸 至体积减少到15ml左右,冷却后移入 50mL 比色管中。若有沉淀产生应将沉淀过滤。
按照绘制标准曲线的相同操作步骤操作,测量吸光度并做空白校正。;
式中:m:由标准曲线查得的铁含量(μg)
V:水样体积(ml)
;7.注意事项;8.思考题;小结;谢谢!
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