非共價法製備分子模印高分子及其應用於藥物之層析分離.docVIP

黃清江 郭進原 李文乾 非共價法製備分子模印高分子及其應用於藥物之層析分離 PAGE 第七屆生化工程研討會論文集 非共價法製備分子模印高分子及其 應用於藥物之層析分離 黃清江、郭進原、李文乾 國立中正大學化工系 摘 要 本研究係利用分子模印(molecular imprinting)技術，製備能層析分離對掌性藥物的高分子。此高分子係以非共價鍵結方式，分別以(-)及(+)苯丙醇胺(phenylpropanolamine，縮寫為PPA)為模板(template)分子，甲基丙烯酸(MAA)為官能性單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)為交聯單體，在4?C下以紫外光照射進行整體聚合而得。不管以其中何者為模板分子，所得高分子研磨成顆粒並填充管柱(25 cm?0.46 cm i.d.)，經洗去模板分子之後，發現皆可以有效地層析分離（?）苯丙醇胺，得到高純度的兩個光學異構物，分離因子均遠大於逆相層析的結果。 __________________________________________ __________________________________________ 李文乾 國立中正大學化工系教授 Tel: (05) 2720411轉33406 E-mail: chmwcl@ccunix.ccu.edu.tw 郭進原 國立中正大學化工系學生 黃清江 國立中正大學化工系學生 1.前言 目前市面上超過一半以上藥物，具不對稱的分子結構(Kempe and Mosbach，1995)。具等量但光學活性不同的兩個對掌體(enantiomers)，因為彼此間的性質各異，所以對自然界中生物系統的表現亦各有不同。已經證實不少藥物，它們的生物藥理活性只存在於其中一個光學異構物中。具有生物藥理活性的異構物稱為eutomers，而相對另一個異構物則稱為distomers。互為鏡像的兩個對掌異構物，其活性或藥效通常差別很大，有些distomers僅具微弱藥理活性或不具任何作用。這些distomers產生的副作用或不良反應有時雖然不明顯，但在體內仍會因代謝作用而對生理器官造成不必要的負擔。光學異構物的製備與分割方法逐漸受到重視 (Mayes and Mosbach，1996)，為了解個別異構物在臨床上的藥理作用，有必要發展適當的分離與分析方法。過去有利用酵素法、毛細管電泳或層析法來進行對掌異構物的分離，一個普遍性與高效率的光學異構物之分割方法仍有待建立。本研究以分子模印技術製備高分子顆粒，應用於層析方式分割苯丙醇胺光學異構物。 2.實驗方法 2.1分子模印高分子的製備 分別以結構簡單的仿交感神經藥物(-)及(+)苯丙醇胺為模板分子，在惰性溶液中行整體聚合反應。採用低溫紫外光照射誘發自由基之聚合反應，步驟如下： 將(-)phenylpropanolamine 或者(+) phenylpropanolamine 0.1克、單體(MAA) 0.223毫升，交聯單體(EGDMA) 2.488毫升、起始劑(AIBN) 0.02克和溶劑(chloroform) 5.0毫升放入50毫升的錐形瓶中。通入氮氣將瓶內空氣趕出，將此50 ml錐形瓶放入4 ℃冰箱中的二重保溫杯中，打開恆溫水槽開關，讓冰水循環流動於二重保溫杯中，以確保溫定的穩定。在100 W的UV燈照射之下，聚合反應六小時。反應後將錐形瓶在室溫下，真空烘乾12小時。將乾燥後的高分子材料研磨，篩選25~44μm大小的顆粒。 為得到最佳分離效果的高分子顆粒，除了使用上述不同模板分子，改變聚合溫度與聚合方式之外，也改變聚合的配方如交聯單體的使用量等。 2.2管柱的填充、模板分子的移除、以及HPLC操作 1. 以甲醇作為泥漿溶液，將高分子顆粒與之混合，於超音波震盪15分鐘後倒入泥漿儲存槽中。另以丙酮作為推進劑，填充層析管柱25cm ? 0.46 cm，填充壓力為300 bar。 2. 調配甲醇-醋酸(9:1 v/v)混合溶液作為沖洗液，先於超音波震盪除氣，沖洗層析管柱使基線達穩定止。 3. 以氰甲烷、醋酸、甲醇、去離子水，不同比例混合溶液作為移動相。先於超音波中除氣，以一定的流量流速(0.3 ml/min)注入管柱，管柱溫度維持25 ℃。注射不同濃度的樣品溶液，紀錄管柱出管溶液於波長257 nm之下的吸收值，確定樣品被沖提出來，基線穩定之後，再注入第二個樣品，進行下一個層析。 3.結果討論 3.1分子模印高分子的合成 本研究一開始採用高溫熱起始自由基聚合製備分子模印高分子，即50℃反應12小時之後所得高分子，經研磨成顆粒填充管柱，發現無法層析分離(?)苯丙醇胺，而且理論板數相當低。因為製備分子模印高分子的要件是模板分子能夠與聚合的單體與交聯劑等形成穩定之複合體，聚合之後洗去模板分子即留下外型與模板分