分子生物学基因工程和核酸杂交 .ppt

* 质粒的分子量一般为106~108 ，小型质粒的长度一般为1.5~15Kb。 遗传标志，如：抗生素的抗性基因，?-半乳糖苷酶基因（lac Z）等。 * cDNA探针的制备由于受RNA酶的影响有一定的难度，曾经限制了其应用。随着反转录试剂盒的商品化，cDNA探针的制备 * * * 1．生物素标记核酸探针 生物素是目前应用最广的非同位素标记物之一，生物素是一种小分子水溶性维生素。最早发现它可通过一条碳链臂可共价连接在嘧啶环的5位碳原子上，对TTP 或UTP进行标记。目前一系列生物素标记dATP和dCTP 也被应用，例如Bio-16-UTP、Bio-7-dATP、Bio-11-dCTP和Bio-11-UTP等，其中中间数字表示多胺连接臂的碳链长度。上述各种标记核苷酸均可替代同位素标记的相应dNTP，在DNA聚合酶催化下，通过缺口平移法或随机引物等方法将它们掺入到DNA分子中，从而获得带有生物素的DNA或RNA探针。同时生物素还是一种抗生物素蛋白（卵白素）和链霉素类抗生物素蛋白的配体，可以利用免疫法进行检测。 2．光敏生物素标记核酸探针 生物素酶促标记法由于操作复杂，价格昂贵，限制其使用，因此人们设计出化学标记法，直接将生物素标记在核酸探针上，即光敏生物素标记核酸探针。 光敏生物素是由对光敏感基团和生物素结合而成的一类标记物多种光敏基团可以