血清γ-球蛋白的离、纯化(实验六).pptVIP

血清γ－球蛋白的分离、纯化 ;实验原理;实验原理;由于血清中各种蛋白质所带电荷多少、颗粒大小及亲水程度都不一样，因此使用某种中性盐进行盐析时，所需要的盐浓度也各不相同。 50%饱和度的硫酸铵能使血清中的球蛋白沉淀，而33％饱和度的硫酸铵则使γ-球蛋白沉淀。 可根据所要分离的蛋白质，选择不同饱和度的硫酸铵溶液进行盐析。 ;（二）浓缩 一般实验室常用的是透析袋（半透膜）浓缩。 半透膜具有选择透过性，只允许离子和小分子扩散进出，生物大分子（蛋白质等）不能自由通过半透膜。 将待浓缩的蛋白质溶液放入透析袋内，用绳子扎紧，然后置于烧杯中。 ;实验试剂与器材;实验步骤;;;（二）浓缩 将上述收集的蛋白质+ 1mlPBS ，沉淀完全溶解后，放入透析袋内，用绳子扎紧，然后置于100ml烧杯中，加入纯净水。 3~5min后，取1ml烧杯中溶液至试管中，再滴加BaCl2若出现白色混浊，将烧杯中的水倒掉，再换上纯净水。 直至滴加BaCl2溶液不再出现白色混浊为止。 ;注意事项;思考题