实验二 植物体内酸还原酶活力的测定.pptVIP

实验二 植物体内硝酸还原酶活力的测定 NO3-和NH4+是能被植物利用的最主要的氮源。在一般田间条件下， NO3- 是植物吸收的主要形式。 硝酸盐的还原 硝酸还原酶是一种诱导酶，在植物体内本来不含有，但在特定外来物质的如NO3-诱导下可以生成硝酸还原酶。 【实验原理】 硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐： NO3- +NADH + H+ NO2- +NAD+ +H2O 产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸（或对氨基苯磺酰胺）及α - 萘胺（或萘基乙烯胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。 生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以单位时间内每克鲜重含氮量表示，即以μg/g/h为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。 【实验器材】 ⑴冷冻离心机；⑵分光光度计；⑶天平 (0.01g)；⑷冰箱；⑸恒温水浴；⑹研钵；⑺剪刀；⑻离心管；⑼移液管(5、2、1mL) ；⑽洗耳球；⑾试管架；(12)胶头滴管。 【实验步骤】 标准曲线制作 取7支洁净烘干的15ml刻度试管按下表顺序加入试剂，配成0-0.20μg/mL的系列标准亚硝态氮溶液。摇匀后在25℃下保温