细胞工程复习课件.pptVIP

3.动物细胞培养条件： （1）、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） （2）、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） （3）、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 （4）、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 保证细胞顺利的生长增殖 4、动物细胞培养技术应用 （1）、大规模培养生产生物制品（病 毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） （2）、作为基因工程中的受体细胞 （3）、培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 （4）、为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 细胞的全能性 细胞增殖 植物组织培养和动物细胞培养的比较 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞分泌蛋白 供体细胞 （供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质） 去核 无核卵 母细胞 注入 细胞 融合 重组细胞 构建重组 胚胎 胚胎 移植 代孕 母体 生出与供体奶牛遗物质基本相同的犊牛 归纳: 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状 核移植过程 2、为什么不是取供体细胞核进行核移植操作，而是直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？ 保证供核不被破坏，使所得个体的性状更符合供体。 1、受体细胞为什么选用卵母细胞？ 卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性的某种物质和营养物质。 2.体细胞核移植的过程 P49 讨论： 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。 3.体细胞核移植技术的应用前景 （1）在畜牧业 中可以加速家畜 遗传改良的进程. （2）保护濒危 物种. （3）医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植. 动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 （膜融合、 诱导方法 质融合、 核融合） 单核细胞 为什么灭活的病毒能作诱导剂？ 丧失感染性，保留融合活性 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 使用的酶 诱导方法 主要用途 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 小鼠的B淋巴细胞 杂交瘤细胞 融合 小鼠的骨髓瘤细胞 克隆 产生大量的杂交瘤细胞，获得大量的单一抗体。 如何筛选出杂交瘤细胞？ B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 合成DNA 合成DNA D途径，S途径 D途径 D途径能被一种化合物——氨基喋呤阻断。 B B-B 瘤-瘤 瘤 杂交瘤细胞 如何筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞？ 骨髓瘤细胞 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？ 在具有筛选作用的培养基上培养 杂交瘤细胞有什么特点？ 杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传特性， 既能产生专一抗体又能无限增殖。 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种） 第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 单克隆抗体 特异性强，灵敏度高 克隆上述杂交细胞 B淋巴细胞 融合 注射特定抗原蛋白 2、单克隆抗体的特点？ 特异性强、灵敏度高 1、杂交瘤细胞的特点？ 能无限增殖、分泌抗体 单克隆抗体的应用 诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 运载药物 (“生物导弹” —单抗导向，药物为弹头) 例.下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答： （1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得_____________细胞，该细胞能够产生_____________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。 （2）B过程是一个_____________过程，该过程的进行需要灭活的______