聚二甲基硅氧烷(PDMS)-玻璃微流控芯片电泳快速分离血清高密度脂蛋白亚类及临床应用研究.pdfVIP

第40卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第2期 2012年2月 ChineseJournalof 230～235 AnalyticalChemistry OOl：10．3724／SP．J．1096．2012．10242 聚二甲基硅氧烷(PDMS)／玻璃微流控芯片电泳快速分离 血清高密度脂蛋白亚类及临床应用研究 钱晶晶1 季伙燕l，2 丛辉1 王惠民u 金庆辉2 1(南通大学附属医院，南通226001) 2(上海微系统与信息技术研究所，上海200005) 摘 要经梯度密度超速离心，高密度脂蛋白(HDL)分为HDL：和HDL，两亚型。HDI．q抑制低密度脂蛋白 (LDL)氧化功能受损是冠心病(CHD)发生发展的关键因素。因此，通过对HDL亚类进行分离，从而达到预测 和诊断CHD的目的。本研究建立了用PDMS／玻璃微流控芯片快速电泳分离HDL亚类的方法。选择N一十二 烷基一伊口麦芽糖苷(DDM)、十二烷基硫酸钠(SDS)和羟丙基纤维素(HPC)共同修饰脂蛋白和泳道表面。在以 mmol／L mmol／L 含0．3 SDS的50 8．O)为样品缓冲液，含0．6％HPC的 3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)(pH 50mmol／L 8．O)为分离缓冲液，分离电压为260V／cm的优化条件下，HDLa和Ⅷ)k在4min内得到基 MOPS(pH 线分离，二者的出峰时间和峰面积的相对标准差(RSD)分别是2．o％和2．7％，2．0％和2．9％，具有较好的重复性。 临床标本研究发现，正常人血清标本可分离出HDl_。和I-IDIm双峰，而CHD患者的HDL2峰面积显著减小，甚至 消失。PDMS／玻璃微流控芯片分离HDL亚类是一种简单、快速、高效的用于分析CHD危险因子的方法。 关键词PDMS／玻璃微流控芯片电泳；冠心病；高密度脂蛋白亚分 1 引 言 流行病学研究表明，氧化低密度脂蛋白(LDL)在冠心病(CHD)的发病过程中发挥关键作用11．2】，而高 密度脂蛋白(HDL)水平与CHD发病率呈负相关口一。过去的研究认为，HDL对心血管的保护作用是通 过逆向转运胆固醇实现的；而最新的研究发现，该作用更多的是依赖其抑制LDL氧化实现的“】。HDL 抗LDL氧化修饰是通过减少LDL导致的动脉粥样硬化和抑制单核细胞在动脉管壁的聚集两条途径共 同实现的M。采用梯度密度超速离心法可将人类HDL分为HDL：和HDL，两种亚型嘲。虽然HDL，比 HDL：抗LDL氧化功能更强【l捌，但CHD患者的HDL：而非HDL，抗氧化功能受损川，具体机制不明。 近年来，多聚物在微流控领域中的应用日益广泛，其中PDMS是迄今为止最常用于微流控芯片制 备的多聚物限卿。PDMS是一种常见的高分子聚合有机材料，具有价格低廉，易于构筑，透光、化学性质稳 定，易于与玻璃等其它材料键合，无毒及生物兼容性好等优点。但也存在多孔疏水、表面电荷低、电渗流 (EOF)小等缺点。因此，在未经修饰的PDMS微流控芯片上进行蛋白分离时，常出现峰拖尾和不能有效分 离的现象”¨埘。对PDMS进行表面修饰是一种拓宽其应用范围的有效方法，目前的修饰方法种类众多， 其中动态修饰是一种最简单有效的方法，通常是在缓冲液中加人类似多聚物或表面活性剂等物质Il朋。 目前HDL亚类的分析方法主要有超速离心法119】、梯度凝胶电泳法1201、质子核磁共振光谱法跚l、免疫 亲和层析法圆、双向电泳一免疫印迹法1231等，这些方法多存在费时耗力，技术要求高及仪器复杂等不足， 更多的是进行基础研究实验，难于在临床应用。二氧化硅微流控芯片电泳法是目前HDL亚类分离最简 便有效的方法洲，但二氧化硅构筑微流控芯片价格昂贵、耗时，且需要特殊设备，还受特殊加工工