食品毒理学致 突变.pptVIP

* 正常细胞、微核细胞 * 3、染色体畸变分析chromosome aberration assay 观察染色体形态结构和数目改变，又称细胞遗传学试验。 将观察细胞停留在细胞分裂中期相，用显微镜检查染色体畸变和染色体分离异常。 * 4、显性致死试验Dominant lethal test 显性致死突变指哺乳动物生殖细胞染色体发生结构和数目变化，出现的受精卵在着床前死亡和胚胎早期死亡。 它是评价化学毒物对雄性动物的生殖细胞遗传毒性较好的方法之一。 * 5、果蝇伴性隐性致死试验Sex-linked recessive lethal test, SLRL 利用隐性基因在伴性遗传中具有交叉遗传特征，选择黑腹果蝇，给雄蝇受试物，如雄蝇的X染色体有突变，传给F1代雌蝇，再通过F1代雌蝇传给F2代雄蝇，使位于X染色体上的隐性基因在半合型雄蝇表现出来。 * * 一条染色体的两条单体在同一位置发生同源片段的变换，称为姐妹染色单体交换。由于交换是对等的，所以染色体的形状没有改变，但用特殊的培养液和处理方法可以显示出来 6、姐妹染色单体交换 Sister-chromatid exchange, SCE * * SCE的遗传学意义还不完全清楚，是否存在自发的SCE也还有争议，交换的机理尚未完全阐明，但它显然与DNA损伤和修复过程有关。作为一种简便和敏感的遗传学指标，它在诱变和肿瘤研究等领域中的应用十分广泛。例如，目前已知许多环境诱变剂、职业有害因素、抗肿瘤药物、病毒等都可以引起SCE率增加，Bloom综合征患者和某些肿瘤患者的SCE率也明显上升。 * 7、荧光原位杂交技术Fluorescence in situ hybridization, FISH 利用荧光探针，将已标记或经特殊修饰的核酸探针与已固定的组织、细胞或染色体中DNA、RNA杂交，继而通过分析标记探针在被检对象中的显示状况而达到对特殊目标顺序进行检测、定位的目的。 * An example of FISH-treated metaphase chromosomes chromosomes 1, 2, and 4 were labeled yellow with FISH and the other chromosomes were stained red. Translocations between yellow and red chromosomes are detected. The left picture represents a normal cell and the right picture is an example of reciprocal translocation with two bi-color chromosomes (indicated by two arrows). * 8.单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis，SCGE) 在单细胞水平上定量检测DNA损伤 * 原理：在电泳槽中，DNA断片在电场的作用下，由细胞核中移出，并向阳极泳动，经荧光染色后见到细胞核和移出的DNA断片，形成有如彗星一样的彗星头和彗星尾，故又称彗星试验（comet test) * 1.阴性、阳性对照的设立： 阴性对照：即未处理对照或溶剂对照 阳性对照：用某种已知能产生阳性反应的物质作对照 三、致突变试验中的一些问题 * 2.体外试验活化系统的采用 许多化合物不具有致突变性，经哺乳动物代谢才转变成致突变物。由于微生物和培养的哺乳动物细胞缺乏整体动物体内的许多代谢能力。必须加入代谢活化系统以检出前致突变物。 * （1）盲法观察 （2）阴性对照和阳性对照的设立 （3）资料的统计学分析 （4）试验结果的重现性 3.致突变试验的质量控制措施 * DNA执行高保真的复制 修复DNA损伤 损伤耐受机制:是指DNA遗传可绕过那些阻止DNA复制的DNA损伤机制 修复机制：直接修复和切除修复 遗传信息代 代相传，并 且高度保真 * 1.DNA损伤不仅可因外源性因素所致，也可因内源性因素所致 2.不同类型DNA损伤通过不同的DNA修复途径修复 DNA损伤修复的一般特点 * 3.不同类型DNA损伤修复速度是不同的 4.DNA损伤修复机制有些是基本的，有些是可诱导的 5.DNA损伤修复功能存在物种和个体差异 * 一、DNA损伤的修复 1.光复活（photoreactivation)：修复紫外线损伤产生的胸腺嘧啶二聚体，广泛存在原核和真核生物体内 2.“适应性”反应：主要是O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT)修复鸟嘌呤O6位的烷基化损伤 * * 3.切除修复 切除修复分为： 碱基切除修复（BER)： 核苷酸切除修复