第二章-基因工程工具酶.pptVIP

第二章 基因工程工具酶 酶活性与热稳定性 酶蛋白分子量 94KDa，比活性200 000∪/mg，Taq酶的浓度通常为1~2.5∪/?l，太多浪费并易导致非特异性扩增。 热稳定性好：能耐受DNA变性时的高温 在92.5℃、95℃ 、97.5℃时，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min、40min、5min后，仍可保持50%的活性。 PCR反应时变性温度为95℃～20sec，50个循环后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。 Taq DNA聚合酶是Mg2+ 依赖性酶，对Mg2+ 浓度非常敏感。 Mg2+浓度2.0mmol/L时，能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性。 Mg2+ 能与dNTP结合而降低PCR反应液中游离的Mg2+ 浓度，优化浓度一般反应 中Mg2+ 浓度至少应比dNTP总浓度高0.5～1.0 mmol/L。 适当浓度的KCl能使Taq DNA聚合 酶的催化活性提高50～60%。 离子依赖性 TaqDNA聚合酶具有5′→3 ′聚合酶活性和5′→3ˊ外切酶活性，而无3′→ 5′外切活 性，在PCR反应中如发生某些碱基的错配，该酶是没有校正功能。Taq DNA聚合酶的碱基错配机率为2.1×10-4。 Taq DNA聚合酶还具有逆转录酶活性. 忠实性 Taq酶的最适温度 最适温度： 72-78 oC 延伸速