实验十四酵母蔗糖酶的提取纯化及活力测定.pptVIP

实验十四 酵母蔗糖酶 分离、 纯化、活力测定、电泳检测 蔗糖酶的提取纯化 一、实验目的和要求： 了解离子交换层析的基本原理。 掌握蔗糖酶的提取纯化及离子交换层析的基本步骤。 熟悉有关生化技术的操作方法。 二、实验原理 蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它催化蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。因此，每水解1 mol 蔗糖，就生成2 mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，如Nelson 比色法、斐林试剂法等。 本实验用干酵母为原料，通过破碎细胞，热处理，乙醇沉淀，柱层析等步骤提取蔗糖酶（invertase），并对其性质进行测定。 采用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量，由此即可得蔗糖水解的速度。 在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。酶的提纯工作往往要求多种分离方法交替使用，才能得到较为满意的效果。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。蛋白质在分离纯化过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离效果。啤酒酵母中，蔗糖酶含量丰富。 离子交换层析是常用的层析方法之一。它是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的