细胞培养基质量标准与检验方法.docVIP

PAGE 1 细胞培养基质量标准及检验方法 中国医药生物技术协会 二0一一年四月 编写说明 根据中国医药生物技术协会2010年9月20日 组织召开的《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会》纪要，结合我国的实际情况制定本标准。 本标准以《中国药典》2010版和《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T 3935-2007）行业标准为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求制定，增加了牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量等检测项目。 本标准分为细胞培养基检验项目和每个项目的检验方法两部分，为评判细胞培养基产品质量提供了依据和方法，从而规范我国细胞培养基行业健康发展。 结果评定 依据本标准和方法对细胞培养基样品进行全项检验，所有项目均符合标准要求，判定该样品为合格；若有一项不符合标准要求，则判定样品为不合格。 细胞培养基质量标准及检验方法 细胞培养基质量标准 细胞培养基质量应符合表1所示的技术要求。 表1 技术要求 检验项目 限度要求 检验方法 澄清度 澄清 中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ B进行。 pH值（每升标示量/L） pH允许偏差范围为±0.30 中华人民共和国药典2010年版附录Ⅵ H进行。 渗透压（mOsm/kgH2O） 渗透压允许偏差范围为±5％ 中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ G 渗透压摩尔浓度测定法进行。 干燥减量的质量分数（%） ≤5.0 按中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅷ L 干燥失重测定法进行。 细菌内毒素（EU/ml） ≤10 按中华人民共和国药典2010年版附录Ⅺ E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。 微生物限度 细菌数（CFU/g） ≤200 按中华人民共和国药典2010年版附录Ⅺ J 微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。 霉菌数（CFU/g） ≤50 细胞生长试验（vero细胞） 细胞形态 成纤维样贴壁生长，形态正常无变异 按中华人民共和国化工行业标准《哺乳类动物细胞培养基》HG/T 3935-2007第7.7条进行。 细胞数量 培养72h细胞数量不低于1×105cells/ml；继续维持48h细胞数量不低于1×105cells/ml 牛血清白蛋白 不得检出 依据中华人民共和国药典2010年三部附录Ⅷ I牛血清白蛋白残留量测定法进行，不得检出牛血清白蛋白。 抗生素 不得检出 依据中华人民共和国药典2010年三部附录Ⅸ A抗生素残留量测定法进行，不得检出青霉素、链霉素及庆大霉素。 检验方法 除非另有说明，检验中仅使用确认为分析纯的试剂和中华人民共和国药典2010年版中规定的纯化水。 2.1 澄清度的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ B进行。 2.2 pH值的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。 2.3 干燥减量的测定 按中华人民共和国药典2010年版三部附录Ⅶ L 干燥失重测定法进行。 2.4 渗透压的测定 称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。 2.5 细菌内毒素的测定 按中华人民共和国药典2010年版三部附录Ⅻ E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。 2.6 微生物限度的测定 按中华人民共和国药典2010年三部附录Ⅻ G微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。 2.7 细胞生长试验 2.7.1 贴壁型细胞生长试验 2.7.1.1 方法提要 1)本试验所用容器具及溶液均为无菌，试验操作过程均为无菌操作。 2)细胞在37℃恒温条件下，在含体积分数3%或10%的小牛血清的细胞培养液中生长72h，观察细胞形态并进行细胞计数；细胞生长72h后，更换不含小牛血清的细胞培养液，继续培养48h，观察细胞形态并进行细胞计数。 2.7.1.2 试剂和材料 1)牛血清：符合中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅩⅢ D。 2)平衡盐溶液：称取氯化钾0.2g，精确至0.01g；无水磷酸二氢钾0.2g，精确至0.01g；氯化钠8.0g，精确至0.01g；无水磷酸氢二钠1.15g，精确至0.001g；加纯化水1 000ml，混匀，测pH值，pH值应在7.5±0.3，