生化分析仪检测 原理.pptVIP

干扰物质 1.脂血：吸收光谱300--600nm呈下降趋势 2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰 3.胆红素：300--500nm有吸收峰 可见它们的吸收峰都较宽，且同测定波长有重叠现象。 双波长法 双波长测定优点 ： ①消除噪音干扰 ②减少杂散光影响 ③减少样品本身光吸收的干扰 固定时间法 指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，这两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，利用这两点吸光度差值计算结果。 如：苦味酸法测肌酐 计算公式： C=(A2-A1)*K A1 A2 · ● T (吸光度） ● 测定底物的消耗或产物生成的速度的化学方法称为连续监测法（又称动态分析法、速率法或动力学法）。在反应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化。通过测定一段时间内吸光度的变化速率（ △A/min ）来计算待测物的浓度。 酶活性测定如（ALT、AST、ALP、GGT等）常用 连续监测法（速率法） 酶促反应曲线 连续监测法 即零级反应速率法,亦称斜率法 在较长反应时间区段内(90-180秒)，每隔一定时间(5~30秒)读取一次吸光度值，至 少读取4点，得到3个以上△A，最后算出 反应速率△A/min。 酶促反应进程曲线 * * A1 T A S+R1 R2 A2 (吸光度） （时间） 连续监测法 A/min=[(A2-A1 )-(空白)]/(t2-t1) t2 t1 连续监测法特点 与固定时间法相比，属于即时观测，无需停止酶促反应、不需添加其他呈色试剂，且可将多点的测定结果绘图连线，快速、直观查看酶促反应进程，很容易找到呈直线的线性期，检查到是否偏离零级反应。 典型酶联法反应曲线 ALT反应曲线 AMY反应曲线 生化结果报告审核 责任心不强，未对结果进行认真审核 对检测仪器或试剂方法学不够了解 工作经验不足 对仪器检测的结果及室内质控结果过于相信 1.结合质控判断结果 在控 在控 GLO=TP—ALB 偏高 2.结合临床资料审核 结合病人的性别、年龄、临床诊断、其他检查结果审核 例：某病人检测的TP为110g/L，该标本没有脂血等影响检测结果的因素 临床诊断：多发性骨髓瘤 另：胰岛素与低血糖、病人输注药物对结果的影响 检验项目间的内在联系 各检测参数间存在大小、比例、逻辑关系 例：TC HDL-C+LDL-C、 TBI DBI CK CK-MB LDHα-HBDH 影响检验结果的因素 试剂线性范围： 了解检验项目试剂的线性范围，对超过或低于范围的项目，必须进行相应的减量稀释或增量后重新测定。 线性范围 在实际工作中，用连续监测法会遇到检验结果为0或者负值的情况，此时不能盲目相信该结果低就出具低值报告，应查看其反应曲线 例：某病人的尿液AMY检测结果为0U/L 其反应曲线如下图： AMY反应曲线 AMY反应曲线分析 分析：由于测定物质浓度过高 处理：对测定物质进行十倍左右的稀释再测定，直到反应曲线恢复正常结果才可靠 AMY反应曲线 AMY反应曲线 第一次 稀释后 检测项目的方法学 分析：CK是由M和B两类亚基组成的二聚体，其构成为CK-MB(心型)约占0-3%、 CK-MM(肌型)约占97-100%、 CK-BB（脑型）约占0-1% 影响检验结果的因素 检测项目的方法学： 要了解该项目试剂采用的方法学： 例：某病人在测定心肌酶谱时，其CK:246U/L、CK-MB:286U/L，标本无溶血等因素影响,其结果中CK-MB﹥CK CK-MB采用的检测方法为免疫抑制法 正常人体中，CK同工酶中CK-MM﹥CK-MB﹥CK-BB,其中CK-BB含量极少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略CK-BB的基础上。采用抗体抑制其M亚基活性，使CK-MM失去活性，而CK-MB失去一半的活性。单测定B亚基的活性，其结果×2即为CK-MB活性。 由于在患轻度或中度脑损伤、脑血管意外及脑手术后 造成脑组织发生实质性损害的病人中，CK-BB会升高，这时该方法测定的CK-MB的活性相当于是CK-MB+2CK-BB的活性之和，造成CK-MB活性假性升高。 检验标本的影响 标本脂血会使反应浊度增加，透光度下降，吸光度增加，从而造成检验结果不准确。如TP、TG、UA显著增高，GGT显著下降或