免疫组织化学概述和制片.pptVIP

免疫组织化学Immunohistochemistry 参考教材 《免疫组织化学实验技术及应用》主编：倪灿荣等 ;第一章 绪 论; 一、免疫组织化学的定义及意义 1、定义 免疫组织化学(Immunohistochemistry)，又称免疫细胞化学(Immunocytochemistry)。 已知的标记抗体（或抗原）原位显示细胞或组织内的相应抗原（或抗体）的方法,进行定性、定量、定位检测。原理：抗原、抗体特异性结合 ; 标记化学反应 酶或其他物质标记抗体 抗原-抗体反应 抗原-抗体复合物 呈??化学反应 底物在酶作用下产生有色物质;3、优点;4、免疫组织化学的意义; 3、抗原决定族（抗原表位）： 特殊的化学活性基团区域; （二）抗体:; （1）可变区（ variable region, V ）： Ig分子氨基端，Aa的组成和排列顺序有变异，决定了抗体结合的特异性。;同一种属动物对不同抗原产生的同类抗体: V区:不同， C区:相同，免疫原性:相同。 抗体 抗抗体（二抗：种属特异性抗体）; 四、基本类型与原理 （一）直接法（一步法） 原理： ;（二）间接法 原理： ;（三）非标记抗体酶法;2、PAP法（peroxidase –Antiperoxidase,过氧化物酶－抗过氧化物酶法）;（四）亲和素-生物素法 亲和素-生物素－过氧化物酶法（Avidin Biotin Complex： ABC法） 原理：预先制备ABC复合物 ;五、分类:按标记物的不同 免疫荧光组织化学 免疫酶组织化学 亲和免疫组织化学 免疫金-银标记技术 免疫双重和多重组织化学 杂交免疫组织化学;六.基本过程;第二章 组织学制片技术;一、定义和意义;二、制片方法;2、类型：根据所用支持剂（包埋剂）的不同，分为：; 三、基本程序; （一）取材：从人或动物体内取下所需组织材料的过程; （1）麻醉： ①吸入麻醉：将浸有乙醚或氯仿的棉球连同动物一起放入密闭容器内麻醉。 适用对象：小动物 缺点：乙醚麻醉：肺部充血、呼吸道分泌物增多 ②注射麻醉：静脉、肌肉或腹腔内注射 麻醉剂：3%戊巴比妥等 适用对象：较大动物 缺点：内脏淤血;（2）空气栓塞：向动物静脉内注入一定的空气 适用对象：较大动物，如兔、犬 缺点：血管、内脏淤血;3、致死原则：;（5）组织块大小适宜：结构完整，组织块：小、薄： 1cm ×1cm ×0.2cm,最厚不能超过0.5厘米 （6）修剪附带的其他组织;（8）保持清洁：尤其是消化管 用生理盐水洗去血液、污物、粘液及食物残渣 ;（二）固定;3、固定剂;（2）固定剂的种类 按作用原理分： ①凝固性：甲醛，重铬酸钾;①单一固定剂：一种试剂组成 只对细胞的某种成分固定得较好，不能将所有的成分都保存下来;（3）常用单一固定剂的性质及用法;名称;（4）混合固定剂的优点及配制原则;　③Carnoy液;④Zenker ′S液;（5）固定的方法 ①灌注法：经血管途径将固定液灌注到所需要固定的器官（超微结构） 类型：心插管固定；股动脉插管灌注 ②浸泡法：组织直接浸泡在固定液中。 固定液的量：足够、组织块大小的15~30倍，瓶底垫纱布 ③微波固定：固定的组织收缩小 ④蒸汽固定：避免可溶性成分在固定液中丢失，对人危害大;（6）组织固定后的变化;（7）固定注意事项;（三）洗涤和脱水;②洗涤时≧固定时;（3）脱水剂;（4）酒精脱水;（四） 透明;（1）二甲苯;（2）香柏油;（五）浸蜡与包埋;软蜡Ⅰ 软蜡Ⅱ 硬蜡Ⅰ 硬蜡Ⅱ; 3、浸蜡注意点;4、包埋：浸透石蜡的组织块入新的石蜡中冷却凝固。;（2）材料：L形金属包埋框，玻璃底版、酒精灯、小镊子;（4）包埋后可能出现的问题 ;（5）标本分块 修切蜡块： 正面：正方形或长方形，两边两两平行。 标本四周:1-2mm宽的石蜡 侧面：梯形;1、切片前玻片的处理;2、切片机;（2）切片注意事项： ①刀片:锋利，切片机的螺丝:旋紧。 ②组织块的切面和切片刀间的夹角:5℃。 ③切片速度:均匀 ④石蜡切片正面朝上放（与刀片接触的面为反面）;（3）石蜡切片中常遇的问题及解决办法;组织与蜡分离;（4）石蜡切片的详细过程;脱水：70%酒精