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SDSM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Western Blot Western Blot 八、重组杆状病毒的构建(3.25，一组一份) Sf9细胞 转染试剂 6孔细胞培养板 8.1 重组Bacmid的制备（一组1份） 取3 mL 过夜培养的菌液加入离心管中，12,000 rpm离心1 min，弃上清。 加入300 μL Buffer S1(已加入RNase A)，使用移液器彻底悬浮细菌沉淀。 加入300 μL Buffer S2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解(??5 min)。 加入300 μl Buffer S3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，冰上放置10 min，12,000 rpm离心10 min。 将上一步所得上清加入含有800 μl异丙醇的离心管中，混匀，冰上放置10 min，12,000 rpm离心15 min。 弃上清，加入500 μL70%乙醇清洗沉淀，12,000 rpm离心5 min；重复此步骤一次。 于生物安全柜中，用移液器吸尽上清，沉淀风干，大约10 min左右。 最后40 μL ddH2O溶解Bacmid DNA沉淀，4°C保存备用。 8.2 重组Bacmid转染昆虫细胞制备重组病毒