哺乳动物组织基因组DNA提取(综合性实验).docVIP

PAGE 0 本科学生综合性实验报告 学号： %%%%%% 姓名： @@@@ 学院： 生命科学学院 专业、班级： 11应用生物教育A班 实验课程名称： 哺乳动物组织基因组DNA提取 教 师： 张 玲 开 课 学 期： 2013 至 2014 学年 上 学期 填 报 时 间： 2013 年 10 云南师范大学教务处编印 一．实验设计方案 实验序号及名称：综合性实验: 哺乳动物组织基因组DNA提取（Genomic DNA Extraction from Mammal Tissue） 实验时间 第5、7、8周 实验室 睿智楼3幢422（生物综合实验室1） （一）实验目的(Experimental Purpose)： 1.掌握动物基因组DNA提取的操作方法； 2.掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法。 After the experiment is finished, students should be able to extract genomic DNA from mammal tissue, and to run an agarose gel. （二）实验原理(Experimental Principle)： 本实验利用去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠)是为了使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解，而细胞裂解物又常用蛋白酶K进行水解处理。 随后用酚：氯仿进行抽提，以去除残留的蛋白质，这时蛋白质将进入有机相，或者假如己变性的话将呈现在有机相与水相之间。乙醇沉淀处理则可以浓缩DNA，同时去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。 为了进一步保护DNA样品的完整性，通常需要在缓冲液中添加乙二胺四乙酸(EDTA)以整合Mg2+，这样将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)的活性，因为该酶必须在有Mg2+存在时才会起作用。 本实验方法分离得到的染色体DNA长度为100-150kb，适用于构建基因组文库和Southern杂交分析。如果要求得到较大分子量的DNA，则必须省略其中的振荡步骤。 In the procedure described here, the detergents SDS ( sodium dodecyl sulfate) are added to denature proteins and solubilize lipids in membranes leading to cell lysis . The cell lysate is often treated with enzymes that hydrolyze RNA and proteins. This is generally followed by phenol of phenol: chloroform extraction to remove the remaining proteins, which will either enter the organic phase or, if denatured, appear at the interphase . Chloroform treatment is used to remove the phenol, and alcohol precipitation concentrates the DNA while removing nucleotides, amino acids, and low - molecular- weight oligonucleotides and peptides. As a further precaution, ethylene diamine tetraace-tic acid (EDTA) is include-ed in the buffers to chelate Mg2+. This will reduce deoxyribonuclease (DNase) activity because of the Mg2+ requirement of these enzymes. The protocol described here result in DNA that is easily cut with restriction enzymes a