伪狂犬病毒PCR诊断教学内容.pptVIP

实验九 伪狂犬病毒PCR诊断;实验目的：;什么是PCR？ ;PCR及有关技术的发展历史（1）;PCR及有关技术的发展历史（3）;PCR及有关技术的发展历史（4）;PCR原理;PCR原理;（1）DNA模板的热变性 将待扩增DNA加热到940C左右，使双链DNA解开成为单链，并游离于反应体系中作为模板。 （2）模板与引物的结合（退火或复性） 将体系温度降至合适温度（520C左右），使加入的引物与模板DNA两端（3ˊ端）碱基序列互补结合。;（3）引物延伸 将体系温度升到720C左右，Taq聚合酶催化dNTP 按碱基互补原则连接在DNA引物3ˊ端，使链延伸， 形成两条与模板互补的新链。 以上为1次PCR循环（变性、复性和延伸） （新合成的链可作为下一轮循环的模板） 按照上述（变性、复性和延伸）3个步骤反复循环 ，PCR产物呈指数扩增。 模板DNA 扩增倍数T=2n (n: 循环次数)。;PCR原理;PCR product;标准的PCR反应体系;;; 2. PCR各要素及其作用 （1） 模板 PCR模板可以是DNA或RNA。 以线性DNA模板为佳，量适中，一般为102?105个拷贝； RNA作为模板时，需要： RNA cDNAPCR, 称此为RT-PC