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RT-PCR技术原理简介 RT-PCR简介 RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。 RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。 RT-PCR原理 掌握PCR技术。 学会操作RT-PCR简介PCR仪。 熟悉琼脂糖凝胶电泳技术。 RT-PCR两种方法 RT-PCR反应体系 RT引物的选择 RT逆转录酶的选择 RT-PCR操作流程 1.从细胞或特定组织中提取总RNA； 2.逆转录实验； 3.扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。 实验流程（两步法） 实验流程（一步法） RT实验要素—决定特异性和灵敏度 问题（一）RT-PCR没有产物 问题（二）非特异性扩增 * * 张晓涛 首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再 以cDNA为模板，扩增合成目的片段。 原 因 对 策 原 因 对 策