第六章 目的重组子的筛选与鉴定.ppt

第六章 阳性重组子的筛选和鉴定（检） 由于重组率和转化率不可能达到理想极限，因此必须借助各种筛选和鉴定方法区分转化子与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子与非目的重组子。 转化子 重组子 目的重组子 * PPT课件 阳性重组子的筛选和鉴定（检） 一、根据遗传表型筛选 二、应用限制性内切酶酶切分析筛选 三、核酸探针筛选 四、PCR筛选 五、菌落原位杂交技术 * PPT课件 不同检测方法可以归类于以下三个层次： 载体遗传标记检测 克隆DNA序列检测 外源基因表达产物检测 * PPT课件 一、根据遗传表型筛选 1．抗生素平板筛选 2．?互补筛选 3．插入表达筛选 4．噬菌斑筛选 * PPT课件 1．抗生素平板筛选 大多数克隆载体均带有抗生素抗性基因，常见的有抗氨苄青霉素基因(Ampr)、抗四环素基因(Tetr)、抗卡那霉素基因(Kanr)等。如果外源DNA片段插入载体的位点在抗药性基因之外，不导致抗药性基因的插入失活，仍能编码抗药性基因，这种含有重组子的转化细胞能够在含有相应药物的琼脂平板上生长成菌落。 * PPT课件 但是除阳性重组子以外．自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的基因插入载体形成的重组子均能转化细胞而能生长，故本法仅是阳性重组子的初步筛选。 * PPT课件 同样还可应用插入失活双抗生素对照筛选法，在含有两个