第七章 细菌和噬菌体的重组和连锁精编版.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * Hfr lac+ade+(strs) × F- lac-ade-(strr) 完全培养基混合培养 基本培养基（F-ade+ 菌落） （无腺嘌呤、加链霉素) EMB培养基（影印培养） F-ade+lac- 基因间发生交换 F-ade+lac+ 基因间未发生交换 加乳糖 实验方法： 将重组子菌落影印培养在加有曙红和美蓝的培养基上：以检验能否利用乳糖。 如能发酵乳糖（lac+），菌落是紫红色的。 如不能利用（lac-），菌落是粉红色的。 试验结果：亲组合 52 重组合 15 计算重组频率： 重组菌落数/总菌落数×100 % =(lac- ade+)/[(lac+ ade+ )+(lac- ade+)] × 100% = 15/(52+15) × 100% ≈ 20% 已知中断杂交实验该两个基因相距1分钟, 重组作图与中断杂交作图的图距关系: 1分钟图距 ≈ 20% 重组值 前面提到，时间单位接近2分钟时，测得的基因间的距离，不太可靠，故应采用比较稳定的重组作图法。 Ecoli染色体全长：90分钟；含有：3.6X106bp 20 × 90 ≈ 1800 cM 三点测交绘制基因图谱 F ?因子（ F ?质粒）是带有部分细菌染色体的F因子。Hfr通过交换，可以形成带有部分细菌染色体的F ?因子，而F ?因子又可通过交换整合到细菌染色体上的原来位置，回复到以前的Hfr状态。 F ?因子连同它所带有的部分细菌染色体可一起转移到F-细胞，并形成部分二倍体。这一特性叫做性导。 F ?因子转移到F-细胞的转移速率近于F因子。但它把细菌染色体转移过去的效率比Hfr低得多。不过Hfr的致育因子（F因子）极少进入F-细胞。 F ? 质粒 F ?和F因子 F ?品系转变成Hfr品系的频率要高于F＋品系。 F ?变成Hfr时F ?因子整合到相同位点上，而F＋变成Hfr时可整合到不同位点。 F ?×F－ 高频传递特定的基因，形成部分二倍体，而F＋×F－产生F＋但不转移任何基因，或以10－7将宿主的基因转移，所转移的基因是不同的。 Hfr ×F－将宿主的基因按顺序转入受体，产生重组子频率较高，为10－４。但受体仍为F－（？）。 性别 细菌状态 F因子状态 ♀ F- 无F因子 ♂ F+ F因子为游离状态 ♂ Hfr F因子整合到宿主染色体上 ♂ F? 带有部分宿主染色体的F因子，为游离状态 小结： 1、细菌细胞的两种性别、四种状态： F+ F- 丢失 杂交 F+ Hfr 整合到E.coli 染色体 规则脱离E.coli 染色体 F Hfr 回复到Hfr 染色体 不规则脱离E.coli 染色体 2、F+、 F-、Hfr、F的关系 转变关系 F+×F- 低频重组 Hfr×F- 高频重组 F′×F- 一般为低频重组，但对所携 带的基因是高频重组。 重组频率区别 F＋，Hfr，F?的接合对照 利用Hfr菌株，根据中断杂交试验和基因重组试验及其它基因定位试验的结果，已绘制出的E.coli K12的环状染色体图。 7.2 噬菌体的遗传分析 烈性噬菌体：噬菌体侵染细菌后，把宿主菌的生物合成装置接收过来，合成更多的噬菌体，最后使细菌细胞烈解并释放出很多子代噬菌体。这种使宿主菌烈解的噬菌体叫烈性噬菌体。如T2噬菌体。 温和噬菌体：噬菌体侵染细菌后，细菌好象未被感染一样能继续增殖。如不经诱导宿主菌不发生烈解，这种噬菌体叫温和噬菌体。这种现象叫溶源性，这样的细菌叫溶源性细菌或溶源菌。如P22、P1和λ噬菌体。 噬菌体的繁殖 噬菌斑的鉴定（噬菌体遗传特性的鉴定） 一个噬菌斑中的噬菌体在遗传上是均一的，相当于一个克隆。由于噬菌体的基因型不同，噬菌斑可以是大的或小的，边缘清晰的或模糊的；另外噬菌体的宿主范围（host range）也可能不同，有些噬菌体可以侵染和裂解某些细菌但不能侵染和裂解另外一些细菌，根据这些就可以鉴定噬菌体遗传特性。 T2突变型的两点测交 T2突变型r-：快速溶菌，大界限分明噬菌斑 野生型r+：缓慢溶菌，小溶菌斑 寄主范围突变型h-：能感染E. Coil品系1、品系2。感染E. Coil品系1、品系2共培养，透明噬菌斑 野生型h+：只能感染E. Coil品系1。感染E. Coil品系1、品系2共培养，半透明噬菌斑 T2