课题3　分解纤维素的微生物的分离 (11).pptVIP

分解纤维素的微生物的分离 纤维素 基本单位： 葡萄糖 分布： 棉花、木材、作物秸秆 纤维素酶 （复合酶） C1酶 、CX酶 、葡萄糖苷酶 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶 、CX酶 葡萄糖苷酶 纤维素分解菌的筛选 刚果红染色法 红色复合物 纤维素酶 ①先培养微生物，再加入刚果红进行染色反应； ②在倒平板时就加入刚果红 筛选方法： 刚果红+纤维素 分解纤维素 以纤维素分解菌为中心的透明圈 土壤取样 选择培养* 纤维素分解菌的选择培养基 组分 含量/g 提供的主要营养 纤维素粉 5 碳源、能源 NaNO3 1 无机盐 Na2HPO4·7H2O 1.2 KH2PO4 0.9 MgSO4·7H2O 0.5 KCl 0.5 酵母膏 0.5 生长因子、碳源、氮源 水解酪素 0.5 氮源、生长因子 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL 土壤取样 选择培养* 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 鉴别纤维素分解菌的培养基 组分 含量 提供的主要营养 CMC－Na 5～10 g 碳源 酵母膏 1 g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25 g 无机盐 琼脂 15 g 凝固剂 土豆汁 100 mL 碳源 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL 两种刚果红染色法的比较 项目 方法一 方法二 过程 优点 缺点 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便，不存在菌落混杂 问题 ①由于琼脂、土豆汁中均含有淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假阳性反应；②有些微生物具有降解色素的能力，它们会降解刚果红形成透明圈，与纤维素分解菌不易区分 土壤取样 选择培养* 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选出产生透明圈的菌落 发酵产纤维素酶的实验 对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定 液体发酵和固体发酵 纤维素酶的测定