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274 生 物 工 程 学 报 康东红 等/ OSF 1 在毕赤酵母菌中的分泌表达及其生物活性 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn February 25, 2014, 30(2): 274−283 DOI: 10.13345/j.cjb.130207 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 OSF 1 康东红，王燕，张洪美，冯潇雨，曹维，王萍 , 250014 , , , . OSF 1 . , 2014, 30(2): 274−283. Kang DH, Wang Y, Zhang HM, et al. Expression and bioactivity of OSF-1 in Pichia pastoris . Chin J Biotech, 2014, 30(2): 274−283. 摘 要: 为了研究人成骨细胞刺激因子(Human osteoblast-stimulating factor, OSF-1) 的生物学活性，构建OSF-1 高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF-1 。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1 基因， 并克隆至毕赤酵母分泌表达载体 pPIC9K ，构建重组表达质粒 pPIC9K/osf-1 ，线性化后电转化酵母宿主菌 GS115 ，构建P. pastoris GS115/ pPIC9K/osf-1 ，经MD 、G418-YPD 平板和PCR 法筛选，获得多拷贝转化子。 阳性表达菌株在25 ℃，经1% 的甲醇诱导表达96 h ，重组蛋白的表达量达到最大。经SDS电泳分析所 表达的重组蛋白约为 18 kDa，与人成骨细胞刺激因子相符。表达上清经SP-Sephadex C-50 离子交换层析进行 纯化，得到纯度达98% 以上的OSF-1 。Western blotting 鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗 原性。生物活性测定表明提纯的 OSF-1 能促进鼠成骨细胞 MC3T3-E1 的增殖和分化。利用重组毕赤酵母高 效分泌表达了有生物活性的OSF-1 ，为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础。 : OSF-1 ，毕赤酵母，蛋白表达，纯化，生物活性 Expression and bioactivity of OSF-1 in Pichia pastoris Donghong Kang, Yan Wang, Hongmei Zhang, Xiaoyu Feng, Wei Cao, and Ping Wang Department of Endocrinology , Qianfoshan Hospital, Shandong University, Jinan 250014, Shandong, China Abstract: In order to research the biologic activity of osteoblast-stimulating factor 1 (OSF-1), the pPIC9K/osf-1 yeast expression vector was constructed to express and purify OSF-1. Firstly, the osf-1 gene sequence was obtained by artificial synthesis and cloned into Pichia pastoris expr