高中生物选三修改(lg).docx

PAGE 4 生物选修三 基因工程的概念 1. 基因工程：又叫做基因拼接技术或DNA重组技术，是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。（书p1，不一） 思维拓展 1．对基因工程概念的理解 别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 与杂交育种相比 克服远缘杂交不亲和的障碍 与诱变育种相比 定向改造生物性状 原理 基因重组 2.在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。 3．将一个基因从DNA分子上切割下来，需要2个限制酶，同时产生4个黏性末端。 4．不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶产生的黏性末端可能相同。 基础理论和技术与基因工程 P2 1 DNA是遗传物质的证明 艾弗里等 证明遗传物质是DNA,还能证明DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体. 2 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 沃森和克里克 双螺旋结构模型 梅塞尔松和斯塔尔 DNA半保留复制 中心法则 DNA复制、转录和翻译过程 3 遗传密码的破译 生物共用一套遗传密码 4 基因转移载体的发现 质粒具有自我复制的能力，能再细胞之间转移 5 工具酶的发现 多种限制酶和连接酶，以及逆转录酶 6 DNA合成和测序技术的发明 氨基酸序列分析 DNA序列分析 DNA合成仪（探针、引物等） 7 DNA体外重组的实现 8 重组DNA表达实验的成功 9 转基因动物的问世 转基因小鼠 转基因烟草 10 PCR技术的发明 二．基因工程的基本工具 （一）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（简称限制酶） 1．来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 2．功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列(必须满足回文序列)，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 3．结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 （二）“分子针线”——DNA连接酶 1．分类：根据酶的来源不同，可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类 2．功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ★两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。(从氢键考虑) ★DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 不 同 点 连接的DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 (三) “分子运输车”——载体DNA （1）运载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存； ②具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入； ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 ④对受体细胞无害 eq \o\ac(○,5)载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（即运载体不一定为质粒） （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 （四）与DNA分子相关的酶 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 作用结果 形成黏性末端或平末端 形成重组DNA分子 形成新的DNA分子 形成单链DNA分子 （A=T容易解旋） 三．基因工程的基本过程 (一)目的基因的获取（目的基因是指：编码蛋白质的/结构基因 ） 结构基因指在转录中起到实质作用的基因即无内含子 1.获取方法主要有两种：从基因文库中获取和人工合成。 （1）基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。（鸟枪法） （2）基因组文库包含了一种生物的所有基因。 （3）c-DNA只包含了一种生物的一部分基因。（无启动子终止子） （4）人工合成目的基因的常用方法有逆转录法_和（通过DNA合成仪）化学合成法_。 ★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。（真核有内含子） 2.利用PCR技术扩增目的基因（Taq酶） （1）PCR的含义：