实验4醋酸纤维薄膜法分离血清蛋白质.pptVIP

实验4 醋酸纤维薄膜法分离血清蛋白质 一 、实验目的 二、实验原理 利用带电粒子在电场中移动速度不同而分离的技术称为电泳技术。 醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术，醋酸纤维（即二乙酸纤维素）薄膜具有均一的泡沫状结构（厚约120μm），渗透性强，对分子移动无阻力，故可用它作区带电泳的支持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用等优点。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。 将血清样品点样于醋酸纤维膜上，在pH 8.6的缓冲液中电泳，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，分子大小和形状各异，氨基酸组分、立体构象和相对分子量不同，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α1、α2、β、γ—球蛋白5条区带。 在一定的范围内，蛋白质的含量与结合的染料量呈正比，故可将各蛋白质区带剪下，分别用0.4 mol/LNaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。 三、实验试剂和材料 血清：抗A血清（医用） 巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（pH8.6） 染色液：1％氨基黑10B染料 漂洗液 浸出液 透明液 醋酸纤维薄膜：2×8 cm，厚度120μm 用普通的薄载玻片自制点样器 直流稳压电泳仪，水平电泳槽 Ⅰ.准备和点样： 在浸泡薄膜前应辩清薄膜的正反