H5亚型AIVNS1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达.pdfVIP

生物技术通报 年第 期 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2008 2 H5亚型AIVNS1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达 , 12 3 1 1 1 4 1 詹爱军 王新卫 王宪文 覃健萍 毕英佐 于康震 曹永长 1 2 ( 华南农业大学动物科学学院,广州 510642;深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心,深圳 518042; 3 4 河南农业大学牧医工程学院,郑州 ;中国兽药监察所,北京 ) 450002 100081 摘 要: 应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIVH5亚型毒株NS1基因序列,设计了一对引物,用RT- 方法成功地扩增出带双酶切位点的 亚型 的 基因,通过 和 双酶切位点将 基因 PCR H5 AIV NS1 BamHⅠ EcoRⅠ H5NS1 插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H5NS1并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发 生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体 ,再将其转染昆虫细胞 , 鉴定证实该基因正确 Bacmid-H5NS1 HighFivePCR 地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过 和 检测, 基因在 细胞 SDSWesternBlot NS1 HighFive 中得到了表达, 大小约为 ,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。 H5NS1 28kD 关键词: 禽流感病毒 非结构蛋白 杆状病毒表达 克隆 MolecularCloningofNon-StructuralProteinNS1GeneofH5N1 AvianInfluenzaVirus(AIV)anditsExpressioninInsectCells 1 2 1 1 1 ZhanAijun WangXinwei WangXianwen QinJianping BiYingzuo 3 1 YuKangzhen CaoYongchang 1 2 ( , , ;