一种简易检测6r磷酸葡萄糖的方法.pdfVIP

江苏农业科学　２０１９年第４７卷第１０期 — ２０９— 徐　婷，薛金?，陈亚东，等．一种简易检测６－磷酸葡萄糖的方法［Ｊ］．江苏农业科学，２０１９，４７（１０）：２０９－２１２． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１９．１０．０４７ 一种简易检测６－磷酸葡萄糖的方法 徐　婷，薛金?，陈亚东，刘　华，陈钰佩 （浙江农林大学农业与食品科学学院，浙江杭州３１１３００） 　　摘要：６－磷酸葡萄糖（Ｇ６Ｐ）是多种代谢途径的关键中间产物，一种简易高效的Ｇ６Ｐ测定法建立将有利于深入了 解其在有机体中的代谢状态。前期研究发现，基于离子排斥色谱柱Ｂｉｏ－ＲａｄＡｍｉｎｅｘＨＰＸ－８７Ｈ与示差折光检测器的 高效液相色谱分析无法有效地将这一化合物与１，６－二磷酸果糖、３－磷酸甘油酸区分开来。因而，拟建立一种简便、 专一且灵敏，检测浓度范围为０．２～１０ ｍｏｌ／Ｌ的Ｇ６Ｐ的酶学荧光检测法。同时，我们以模式真核生物酵母为材料，对 μ Ｇ６Ｐ的提取方法进行改进，以使样本的测定更加稳定。 　　关键词：６－磷酸葡萄糖；高效液相色谱；酶学荧光检测；酵母 ＋ 　　中图分类号：Ｑ５３２．５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１９）１０－０２０９－０４ 　　６－磷酸葡萄糖（Ｇ６Ｐ）是细胞内一种常见的化合物，它由 （Ｇ６ＰＤ）的作用生成Ｇ６Ｐ，同时伴随着ＮＡＤＰＨ和中间产物的 葡萄糖在己糖激酶的作用下生成，在细胞内主要参与３种代 形成，它们在多种生物和非生物胁迫的应答反应中起着重要 ［２］ 谢途径：（１）进入糖酵解途径，为生物合成提供细胞能量或碳 的作用 。 骨架；（２）进入磷酸戊糖代谢途径，为细胞提供还原型辅酶Ⅱ 目前，提取动物细胞内 Ｇ６Ｐ的方法有 ２种，分别为 ［３］ ［４］ （ＮＡＤＰＨ）和核酸前体；（３）进入糖原合成途径，为糖原合成 Ａｎｔｏｎｉｏ法 和 Ｒｉｔｔｅｒ法 ，都是使用三乙醇胺溶液提取 ［１］ ［５－７］ 提供Ｇ１Ｐ（葡萄糖 －１－磷酸） 。因此，Ｇ６Ｐ是生物代谢途 Ｇ６Ｐ。测定动物细胞内Ｇ６Ｐ的方法则有色谱法 、高效液 ［８］ ［９］ 径的一个关键节点，其含量会影响细胞活力。已有研究表明， 相色谱法（ＨＰＬＣ） 和酶学法 。色谱法须要配备昂贵的色 在磷酸戊糖途径中，葡萄糖经葡萄糖 －６－磷酸脱氢酶 谱仪，如Ｎｉｃｏｌｅｔ公司的Ｍａｇｎａ－ＩＲ７５０傅里叶变换红外光谱 仪（ＦＴ－ＩＲ），ＡＰＰＬＩＥＤＳＹＳＴＥＭＳ公司的ＤｕｒａｓａｍｐｌＩＲ衰减 收稿日期：２０１８－０１－０８ ［１０］ 全反射