HPLC的故障诊断及其维修.pptVIP

色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 拖尾峰 保护柱或色谱柱问题:污染或失效 进样问题 检测器时间常数不正确 平头峰 检测器设置不正确 进样体积太大或样品浓度太高 HPLC的故障诊断与维修 I. 常见问题 基线噪音 可能的原因： 流动池脏 检测器灯有问题 如果是周期性的，电压或泵的脉冲 温度对检测器的影响 气泡经过检测器 Time (min.) 基线漂移 ? 梯度洗脱 温度不稳定 (示差检测器） 流动相中有污染物 柱中的流动相没有平衡 体系中有污染物流出 可能的原因： 鬼 峰 鬼峰——即使不进样也会出现的峰 没有进样 60 15 30 15 0 3 7 15 17 问题1- 流动相脏 问题2- 容器污染 问题3- 柱子污染 20% - 100% MeOH 没有进样 峰 型 双 峰 柱 塌 陷 正 常 峰 双 峰 柱中有死体积 过滤片部分堵塞 只有一个双峰——组分的共洗脱 可能原因： 样品与溶剂不匹配，溶剂与柱子不匹配 峰 型 所有的峰都展宽 柱效降低——柱死体积 大进样量 / 质量 高粘度流动相 部分峰展宽 前次进样后流出的组分 大分子量样品——蛋白或聚合物 峰展宽 样品与流动相不匹配 峰 型 拖尾峰 对称性 1.2 Normal Tailing Normal Tailing 原因： 部分峰拖尾 二次保留效应——残留硅醇基的反应 小峰紧跟在大峰的后面流出 柱头有污染 金属 所有峰拖尾 额外的柱效应 柱坏/不适当的溶剂 不适当的样品量 峰 型 正常峰 伸舌峰 前伸峰 不对称性 0.9 可能的原因 柱过载 在大峰前，有小峰流出 样品溶剂不适当 柱死体积 过滤片部分堵塞 峰 型 原因: 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相 宽 峰 柱外体积增加 * 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管 * 保证所有的管路接头都使用正确 * 用小体积检测池 * 减少进样量或降低样品浓度 HPLC常见问题 系统压力问题 压力高 压力低或没有压力 压力不稳 流路基线噪音问题 基线不稳定(不重复) 长、短程振荡 基线漂移 噪音脉冲尖刺 HPLC常见问题分析 系统压力问题 压力高的原因 温度太低 流速太高 流动相粘度大 管路堵塞 仪器或色谱柱堵塞 压力传感器问题 HPLC常见问题分析(续) 系统压力问题 压力低或没有压力 温度太高;流速太低 泵关闭或保险丝断了 泵未输送流动相 ?储液瓶中无溶剂 ?低压限设置不当?泵未正确排气 ?溶剂入口过滤头堵 ?入口管路中有空气?泵失效 系统内有渗漏处 所用溶剂不正确 自动进样器在Purge时卡住 HPLC常见问题分析(续) 系统压力问题 压力不稳 压力传感器问题 泵排气不充分 泵失效 流动相未正确脱气 所用溶剂不混溶或易挥发 HPLC常见问题分析(续) 流路基线噪音问题 短程振荡 泵压不稳 泵入口管松,弯或堵塞 溶剂混合不充分 检测池中有大气泡 泵入口阀脏或失效 泵柱塞杆密封垫磨损 检测器出口溶液成滴状流入废液瓶 判断故障与故障排除的原则 规则一∶确认问题至少发生两次以上。如果问题不重复 出现，很难证实其确实存在。 规则二∶一次只变化一个因素，以使你能够确认所变因 素与问题之间的关联。 规则三∶恢复原状。如果使用更换组件方法来查找问题 之所在,完毕后应将原有完好组件安装回原处。 否则,换下的组件将来很难再利用,会造成浪费。 规则四∶尝试预测将来可能发生的问题。利用成功的故 障排除经验来改善您目前的预防保养工作,使现 有问题再发率降至最低。 规则五∶养成记录的好习惯。一个好记录是成功地进行 故障排除的关键。 色谱图常见问题 色谱图常见问题主要有两类: 色谱峰峰形异常问题 例如负峰,宽峰,肩峰,双峰,峰形不对称等 色谱峰保留时间问题 保留时间不稳定等 色谱图常见问题分析(一) 色谱峰峰形异常问题: 色谱图中未出峰: 进样问题:未进样或样品分解 流动相问题:泵未输液或流动相不正确 检测器设置不正确,或检测器有问题 一个或几个峰是负峰 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相 色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 峰比预想的要小 样品粘度过大