一种大量提取红豆杉中总RNA的方法研究.pdf

生物技术通报 ·技术与方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 11 :60-66 一种大量提取红豆杉中总 RNA 的方法研究 陈小凤  曾奇峰  邓旭  曾光尧  周应军 （中南大学湘雅药学院，长沙 410013） 摘 要 ： 旨在确定高质量红豆杉中总RNA 的提取和纯化工艺条件。以湖南长沙红豆杉叶为材料，以Trizol 和CATB 两种植 物RNA 通用提取方法为基础，以RNA 的浓度、OD /OD 及OD /OD 的比值为标准，考察提取方法、提取试剂、提取时间等 260 280 260 230 因素对RNA 提取率的影响，优化了红豆杉叶中总RNA 的提取方法；通过对比PVP 法、β- 巯基乙醇法、高盐沉淀法、低浓度乙 醇沉淀法、凝胶柱层析法五种不同纯化方法来探讨对红豆杉RNA 的影响。考虑到成本的问题，选择使用Trizol 法提取红豆杉总 RNA，确定了较优的提取条件 ：红豆杉叶与Trizol 提取液的作用体积确定为3 ∶40 ；裂解时间确定为5 min ；氯仿与水液的作用体 积确定为1 ∶5。 实验表明凝胶柱层析法能显著的提高红豆杉总RNA 的纯度并能得到富含miRNA 的小分子RNA。最终可得到浓度 约为1 000 μg/mL，OD260/OD280 在2.00-2.20 之间及OD260/OD230 大于1.7 的高质量RNA 样品。与现有的提取方法相比，本方法提取 的红豆杉总RNA 具有很高的质量和纯度，且大大降低了提取成本，并首次实现了植物总RNA 的大量提取。 关键词 ： 红豆杉 ；总RNA 提取 ；Trizol 法；CATB 法；凝胶柱层析法 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2017-0319 - A Method for Extracting Total RNA of Taxus chinensis at Large scale CHEN Xiao-feng ZENG Qi-feng DENG Xu ZENG Guang-yao ZHOU Ying-jun （Xiangya School of Pharmaceutical Science ，Central South University ，Changsha 410013 ） Abstract: This study was directed to develop the optimal method for the extraction and purification of total RNA in Taxus chinensis R. First，we investigated the effects of extraction reagent，time，and method on the yield of total RNA from T. chinensis R. using Trizol and CATB extraction methods in respect of RNA concentration and the ratios of OD260/OD280 and OD260/OD230. Furthermore，we compared the effects of PVP，β-mercaptoethanol，high salt precipitation，