HPLC的原理及通微EasySep系列的应用(20140819）申克宇.ppt

HPLC的原理以及通微EasySep系列的应用主讲：申克宇产品高级工程师sky@ 高效液相色谱原理及发展简史 Easysep系列高效液相色谱仪介绍 Easysep系列高效液相色谱仪应用实例 高效液相色谱原理及发展简史 “色谱”由来 色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。因分离过程中形成有色谱带，色谱法也由此而得名。 色谱法分离的原理 高效液相色谱法的发展 产生于20世纪70年代。 Easysep系列高效液相色谱仪介绍 液相色谱仪应用注意事项 合理选用色谱柱，正确连接色谱柱。 所用流动相必须为色谱级，如含有缓冲盐必须过滤并脱气。所用滤膜要匹配溶剂。 样品必须经过前处理保证清洁、无颗粒。进样浓度不宜过高。 合理进行流动相更换，仪器关机过夜或长期停用流动相体系中不宜含盐。 不可用尖头注射器代替平头进样针。 如何看待药典方法？ 各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应供试样品并达到系统适用性试验的要求。其中，调整流动相组成比例时，以组分比例较低者（小于或等于50%）相对于自身的改变量不超过±30%且相对于总量的改变量不超过±10%为限，如30%相对改变量的数值超过总量的10%时，则改变量以总量的±10%为限。 ——《药典》2010年版 附录30 系统适应性试验的要求 色谱柱的理论板数 分离度 重复性 拖尾因子 色谱柱的理论板数 用于评价色谱柱的分离效能 不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时应指明被测物质。 n=5.54（tR/Wh/2）2 影响理论板数的因数： 色谱柱本身的长度、填料及填充技术 所测样品及方法 样品进样体积 柱外死体积 其他因素 分离度 用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。 R=2（tR2-tR1）/（W1+W2） 除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5 影响分离度的因素： 样品本身的性质差异 色谱柱性能（一切影响柱效的因素） 分离方法：溶剂种类、溶剂比例、pH值、柱温等 重复性 用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。 以峰面积相对标准偏差计算，通常应不大于2%。 重现性的影响因素： 输液系统的稳定性 检测器的性能和稳定性 流动相的影响 柱温的影响 色谱柱的平衡情况 拖尾因子 用于评价色谱峰的对称性 T=W0.05h/2d1 除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95~1.05之间 影响拖尾因子的因素： 样品浓度与进样体积 色谱柱的性能 色谱方法的适应性：溶剂类型、溶剂比例、pH值、流速等 样品溶剂与流动相的匹配 死体积、污染、杂峰干扰等 Easysep系列高效液相色谱仪应用实例 三七样品分离图谱 水飞蓟素分离图谱 （1）本方法主要适用于饮料中的碳酸饮料，茶饮料，营养功能性饮料以及果汁调和类饮料等； （2）本方法主要适用于饮料中安赛蜜，糖精钠，甜蜜素，三氯蔗糖和阿斯巴甜的同时检测； （3）本方法需要配套样品前处理方法。  应用范围 （1）安赛蜜Acesulfame-K ；（2）糖精钠Saccharin Sodium ；（3）甜蜜素Cyclamate ； （4）三氯蔗糖Sucralose ；（5）阿斯巴甜Aspartame 标准分离图谱  实际样品分离图谱 可口可乐碳酸饮料（零度无糖，产品标注添加安赛蜜，三氯蔗糖，阿斯巴甜）  7喜汽水（冰爽柠檬味，产品标注添加安赛蜜，三氯蔗糖） 实际样品分离图谱 实际样品分离图谱 天喔茶庄白茶茉莉（产品标注添加三氯蔗糖）  “毒淀粉” 2013年3月份曝光于台湾，在台湾著名小吃：粉圆、黑轮、板条、芋圆、地瓜圆等5类食品检测中，首次发现违法添加顺丁烯二酸。顺丁烯二酸(HO2CCH=CHCO2H)，又称“马来酸”，为最简单的不饱和二元羧酸，属于树脂等化学黏合剂原料，主要用在工业粘着剂中，以及油漆、杀虫剂、农药的原料，少量用于医药研究。加入淀粉后可增加食物的弹性、黏性及外观光亮度，其价格与合格淀粉相差4到6倍，根本不能食用，但不法商人添加此物到普通淀粉中以增加利润；人体吸入后会引起咽炎、喉