冻融产氨棒杆菌细胞转化法制备三磷酸腺苷.pdf

第 １３卷第５期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１３ Ｎｏ５ ２０１５年９月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｅｐ２０１５ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１５０５００１ 冻融产氨棒杆菌细胞转化法制备三磷酸腺苷 １ １ ２ ２ 丰文飞 ，欧志敏 ，沈绍传 ，贠军贤 （１ 浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 ３１００３２；２ 浙江工业大学 化工学院 绿色化学合成技术 国家重点实验室培育基地，浙江 杭州 ３１００３２ ） 摘　 要：微生物发酵和酶转化法是工业上制备三磷酸腺苷（ＡＴＰ）的有效途径。 以腺嘌呤为关键底物，用冻融通透 化处理的产氨棒杆菌细胞转化制备ＡＴＰ，用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法检测ＡＴＰ含量，考察各种转化条件对ＡＴＰ 产 率的影响，确定最优转化条件：菌体用量４０ｇ／ Ｌ，底物６ｇ／ Ｌ，葡萄糖６０ｇ／ Ｌ，ＭｇＳＯ １５ｍｍｏｌ／ Ｌ，ＫＨ ＰＯ １２０ｍｍｏｌ／ Ｌ， ４ ２ ４ 反应液ｐＨ７４，反应温度３５ ℃。 在最优转化条件下，ＡＴＰ 产率达到８５００％，比优化前提高了５８％，细胞用量大幅 度降低，优化条件稳定可行。 关键词：产氨棒杆菌；三磷酸腺苷；生物转化；腺嘌呤 － － － 中图分类号：ＴＱ９２　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１５）０５ ０００１ ０７ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＴＰ ｂｙ ｐｅｒｍｅａｂｌｅ Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｆｒｏｚｅｎ⁃ｔｈａｗｅｄ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ １ １ ２ ２ ＦＥＮＧ Ｗｅｎｆｅｉ ，ＯＵ Ｚｈｉｍｉｎ ，ＳＨＥＮ Ｓｈａｏｃｈｕａｎ ，ＹＵＮＪｕｎｘｉａｎ （１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３２，Ｃｈｉｎａ； ２． Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｂａｓｅ ｏｆ Ｇｒｅｅｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＳｙｎｔｈｅｓｉｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ，ＡＴＰ ｃａｎ ｂｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｒ ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｎｚｙｍｅｓ． Ｉｎｔｈｉｓｗｏｒｋ，ｐｅｒｍｅａｂｌｅ Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ ｃｅｌｌｓｗｉｔｈｆｒｏｚｅｎ⁃