实验四 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量.docVIP

PAGE PAGE 1 实验四 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量 姓名：mangogola SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的原理是：蛋白质在电泳中的迁移速率取决于其所带电荷、分子大小以及形状等因素，而大多数蛋白质与SDS按一定比例结合（1:1.4/g:g），这样使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，而且形状为短轴相同的雪茄烟形。由此蛋白质分子的电泳迁移率仅取决于其分子量，在特定凝胶浓度下，一定范围内的蛋白质分子量对数与迁移率呈直线关系，选择分子量范围和性质与待测样品相近的蛋白质作标准蛋白，与样品同时电泳计算得到标准曲线，并根据待测样品的相对迁移率在标准曲线上查出其分子量。 一．实验过程 浓缩胶浓度4%，交联度2.7% [Acr（30%）：Bis（0.8%）]溶液 0.67ml dd水 3.05ml 0.5M pH6.8 Tris-Hcl（0.4%SDS）溶液 1.25ml TEMED（原液） 6ul 将以上成分加入小烧杯中轻轻摇匀，加入10%的硫代硫酸铵0.026ml，摇匀后灌胶。 分离胶浓度12%，交联度2.7% [Acr（30%）：Bis（0.8%）]溶液 4ml dd水 3.44ml 1.5M pH8.8 Tris-Hcl（0.4%SDS）溶液 2.5ml TEMED（原液） 6ul 将以上成分加入小烧杯中轻轻摇匀，加入10%的硫代硫酸铵