乳酸脱氢酶同工酶.ppt

第三章 酶与维生素 第二节 酶的结构和催化活性 一、酶的分子组成 (一)酶的不同存在形式 单体酶：由一条多肽链组成。 寡聚酶：含两条或以上多肽链, 即多个相同或不同亚基以非共价键连接形成的酶。 多酶体系：由不同功能的酶聚合而成的多酶复合物。 多功能酶：多种不同催化功能存在于一条多肽链中。 蛋白质部分：酶蛋白 非蛋白质部分：辅因子 全酶 holoenzyme (二)酶的分子组成 单纯酶：指仅由氨基酸残基组成的酶，如淀粉酶等。 结合酶 apoenzyme cofactor 按照分子组成分为两种： 从化学本质上来讲，辅因子可分为两类： 金属离子： 是最常见的辅因子。 金属酶：金属离子和酶结合紧密，如羧肽酶。 金属激活酶：金属离子与酶的结合不甚紧密，如己糖激酶等。 小分子有机化合物： 通常为维生素或其体内代谢转变生成的衍生物，见后。 按照与酶蛋白的结合程度，辅因子又可分为： 辅酶(Coenzyme)： 与酶蛋白结合疏松，可用透析或超滤方法除去。 辅基(Prosthetic group)： 与酶蛋白结合紧密，不能用透析或超滤法除去。 二、酶的催化活性与活性中心 酶的活性中心：酶分子中能与底物特异结合并催化底物转化为产物，这一区域称为酶的活性中心或活性部位。 胰蛋白酶 (Trypsin in Pancreas) 必需基团：指酶分子中氨基酸残基侧链上的一些与酶催化活性密切相关的化学基团。 胰凝乳蛋白酶的活性中心 一级结构 空间结构 活性中心 所有基团 活性中心内 活性中心外的必需基团：维持酶空间构象等 必需基团 结合基团：结合底物 其他 催化基团：催化底物转变成产物 酶分子中的化学基团： 酶的活性中心示意图 二、同工酶的概念与特点 （一）同工酶（isoenzyme）的定义 同一种属中能催化相同的化学反应，但酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质各不相同的一组酶。均具有四级结构，多为由两个或两个以上亚基组成的寡聚体。 （二）原因 同工酶是由不同基因或等位基因编码的多肽链，或由同一基因转录生成的不同mRNA翻译的不同多肽链组成的蛋白质，但翻译后经修饰生成的多分子形式不在同工酶之列。 （三）同工酶特点 1.可存在于同一种属，或同一个体的组织，或同一细胞的不同亚细胞结构中。 2.一级结构可不同，但活性中心相似。 3.由于分子结构差异，催化同一反应，但对底物的专一性、亲和力乃至动力学都可能存在差异，功能也有所不同。 它使不同的组织、器官和不同的亚细胞结构具有不同的代谢特征。这为同工酶用来诊断不同器官的疾病提供了理论依据。 （四）举例：乳酸脱氢酶同工酶 （ lactate dehydrogenase ， LDH ) HHHH (LDH1) HHHM (LDH2) HHMM (LDH3) HMMM (LDH4) MMMM (LDH5) 1.组成和电泳行为 2.功能 催化的反应 乳酸 丙酮酸 LDH5 骨骼肌: 乳酸 丙酮酸 心肌: LDH1 3.特点 ⑴ 由于分子结构差异，具有不同的电泳速度 ：由1→5递减。 ⑵ 对同一底物表现不同的 Km 值。 ⑶ 单个亚基无酶的催化活性。 ⑷ LDH 同工酶在不同组织器官中的含量与分布比例不同，使不同组织与细胞具有不同的代谢特点。 心肌中：主要是 LDH1，对 NAD＋有较大亲和力，易受丙酮酸抑制，作用是使乳酸脱氢生成丙酮酸，便于心脏利用乳酸氧化供能。 骨骼肌中：主要是 LDH5 ，对 NADH 亲和力大，不易受丙酮酸抑制，作用是使丙酮酸还原生成乳酸，有利于骨骼肌产生乳酸。 肌酸激酶（ creatine kinase－CK ) 同工酶 ： 二聚体酶，两种亚基： 肌型（M型） 脑型（B型） 脑中含 CK1 ( BB型 ) 心肌中含 CK2 ( MB型 ) 骨骼肌中含 CK3 ( MM型 ) 血清CK2活性的测定对于早期诊断心肌梗死有一定意义 。  （五）生理及临床意义 1．在代谢调节上起着重要的作用； 2．用于解释发育过程中阶段特有的代谢特征； 3．同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断； 4．同工酶可以作为遗传标志，用于遗传分析研究。 心肌梗死和肝病病人血清LDH同工酶谱的变化 1 酶活性 心肌梗死酶谱 正常酶谱 肝病酶谱 2 3 4 5 * *