第3章 萃取和浸取技术.pptVIP

试验设计题 请用反胶团萃取和反萃取的原理分离细胞色素C(Mr12384，pI10.6）、溶菌酶(Mr14300，pI11.1 )、核糖核酸酶a (Mr13683，pI7.8 ) 这三种蛋白质混合物，并说明理由。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 盐的种类和浓度 影响相间电位： 其中：m+和m－分别为电解质的阳离子和阴离子的分配系数； Z＋和Z－分别为电解质的阳离子和阴离子的电荷数。 影响蛋白质的疏水性HFS：由于盐析作用，盐浓度增加则蛋白质表面疏水性增大。 影响双水相系统：改变上、下相中成相物质的组成和相体积比，利于分离。 pH值 影响蛋白质的表面电荷数：影响蛋白质的解离度。 影响：影响磷酸盐的解离。 pH的微小改变，会引起蛋白质分配系数2-3个数量级的改变 温度 主要影响双水相系统的相图，特别是在临界点附近。 大规模双水相萃取操作一般在室温下进行，主要基于以下考虑： PEG对蛋白质有稳定作用； 溶液粘度较低，容易相分离； 节省冷却费用。 三、双水相萃取操作 （1）过程包括：双水相的形成、溶质在双水 相中的分配、两相的分离 （2） 双水相系统的选择：根据目标产物和杂质的性质差别，综合利用静电作用、疏水作用和添加适当种类和浓度的盐，可选择性萃取目标产物 双水相萃取的特点 操作条件温和 安全性能高 易于放大 操作方便 适于生物活性物质（蛋白质、酶、核酸）的萃取分离 四、应用 1）蛋白酶的提取、纯化 2）核酸的提取、纯化 3）细胞调节生长因子的提取：β—干扰素、EPO等 4）病毒的提取、纯化 5）生物活性物质的分析检测 胞内蛋白质的萃取 优势：可选择性地使细胞碎片分配于下相，目标产物分配于上相，同时实现目标产物的部分纯化和细胞碎片的除去。 实际操作： 细胞匀浆液浓度选择： 为降低成本，应尽量高，但过高会扰乱系统，降低分配系数，系统粘度增高，相分离困难。 一般上限为200－400g湿细胞/Kg萃取系统。 相平衡与相分离： 相平衡：将固状（或浓缩）聚合物和盐直接加入细胞匀浆液中，同时搅拌使之溶解，形成双水相，同时由于双水相系统表面张力很小，相分散容易，达到分配平衡时间很短，一般只需几秒； 相分离：利用离心沉降可大大加快相分离速度，并易于连续化操作。对含细胞碎片的萃取系统，少于40秒。 超临界萃取技术 1．超临界流体 一种流体（气体或液体），当其温度和压力均越过其相应的临界点数值时，即该流体处于超临界状态，我们称其为超临界流体。 PC TC TP 超临界 流体 临界温度（℃） 临界压力（105Pa） 临界密度g/cm3 CO2 31.06 73.9 0.448 SO2 157.6 79.8 0.525 N2O 36.5 72.7 0.451 水 374.3 224.0 0.326 氨 132.4 114.3 0.236 苯 288.9 49.5 0.302 甲苯 318.5 41.6 0.292 甲醇 240.4 81.0 0.272 乙烷 -88.7 49.4 0.203 丙烷 -42.1 43.2 0.220 丁烷 10.0 38.5 0.228 戊烷 36.7 34.2 0.232 乙烯 9.9 51.9 0.227 CO2临界温度Tc = 304.20K（31.06℃）是所有溶剂中最接近室温的，临界压力pc = 73.858×105Pa（7.39MPa）也较适中，特别是临界密度ρc = 0.448g/cm3是常用超临界溶剂中比较高，目前工业水平易于达到，且无毒，无味，性质稳定，不燃，不腐蚀，易于精制，易于回收。因此CO2具有最适合作为超临界溶剂的临界点数据。 超临界萃取定义：利用超临界流体（SCF），即温度、压力略超过或靠近临界温度和临界压力的流体为萃取剂，从固体或液体原料中提取目的产物。 应用：SCF对脂肪酸、植物碱、醚类、酮类、甘油脂等具有特殊的溶解作用，可用于这类物质的萃取分离。 超临界萃取技术 2.超临界流体的优点 表 超临界流体与气体、液体的性能比较 气体 （常温，常压） 超临界流体 液体 （常温， 常压） （TC , pc） （TC , 4pc） 密度g/cm3 0.006~0.002 0.2~0.5 0.4~0.9 0.6~1.6 黏度105kg/（ms） 1~3 1~3 3~9 20~300 自扩散系数104m2/s 0.1~0.4 0.7×10-3 0.2×10-3 (0.2~2) ×10-5 由表中的数据可看出