蟾蜍离体心脏灌流.docVIP

蟾蜍离体心脏灌流 一：实验目的 1、掌握两栖类动物离体心脏灌流的方法，掌握斯氏插管法 2、了解心肌的生理特性，证明心脏具有自动节律性收缩的能力 + K+ C a2+ 对心脏活动的影响。 3、观察 Na 4、理解内环境各种理化因素的相对恒定对于细胞进行正常生命活动的重要意义。 二：实验原理 1、正常蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋，心脏的自动节律性活动需要有 一个合适的理化环境。 蟾蜍心脏离体后， 用任氏液灌流， 在一定时间内仍能保持 节律性兴奋和收缩活动。由于心脏的正常活动还要依赖于内环境因素的相对稳 定，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。 心肌细胞外离子浓度的变化和因 体内生物活性物质 （如激素） 引起的细胞膜离子通透性的改变， 对心肌细胞的生 物电活动和生理特性必然会产生明显的影响。 2、影响心肌细胞电生理特征的原因： （1）心肌的自动节律性：①最大复极电位 与阈电位的差异；② 4 期自动除极速度 （2）心肌的兴奋性：①静息电位的水 +浓度②Na+通道的性状 （3）心肌的传导性：主要 平：依赖于细胞外的 K 取决于动作电位 0 期除极速度和幅度 （4）心肌的收缩性： 依赖于细胞外 钙离子的浓度 + 3、涉及到的几种离子对心脏活动的影响：①钾离子： K 参与心肌细胞的复极化 + 和自律细胞的 4 期自动去极化过程，其改变不仅取决于细胞内外 K 浓度梯度， +通透性有关，因此其影响是多方面的；②钙离子： Ca2+对 Na+ 还与细胞膜对 K 内流存在竞争抑制作用， 称作膜屏障作用， 对静息电位无影响。 其浓度升高可使 心肌细胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。 三：实验器材 动物：蟾蜍（尽量选择体型大的蟾蜍） 试剂：5% NaCl、2%CaCl2、1%KCl 溶液，任氏液 器材：常用手术器械，张力换能器，蛙心套管，套管夹，滑轮，双凹夹，支架， 烧杯 四：实验方法与步骤 1、离体蛙心的制备 取一只蟾蜍，进行双毁髓，按照上次实验的方法进行暴露心脏并仔细识别心 脏周围的大血管。 在左主动脉的下方穿一线， 于动脉圆锥处结扎 （动物个体小时， 结扎位置可靠上些）。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提 起主动脉上的结扎线， 右手用眼科剪在结线下方沿向心方向将动脉上壁剪一 “V” 型口。将盛有少量任氏液的蛙心套管 （用手指将套管堵住， 以防套管中的任氏液 流出）从“ V”型口插入动脉圆锥基部，然后稍后撤套管，使尖端向动脉圆锥的 背后部后下方及心尖方向推进，经主动脉板插入心室腔内（于心室收缩时插入， 但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口） ，可见液面随心搏升降即可。用滴 管吸取套管中的血液， 更换新鲜任氏液。 将分支前主动脉下的松结扎紧， 并固定 在套管的小突上。 小心提起套管和心脏， 剪断主动脉的左右分支； 结扎与静脉窦 相连的后腔静脉，并在结扎线以下剪断，将心脏离体（勿损伤静脉窦） 。用任氏 液反复冲洗心室内余血， 使套管内灌流液不再有残留的血液。 保持管内的液面高 度一致（ 1.5~2cm），即可进行实验。 2、将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉（不可 夹得过多，以免因夹破心室而漏液） 。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力 感受器相连。 注意： 不要使灌流液滴到传感器上， 调节显示器上心脏收缩曲线的 幅度适中。 3、接通张力传感器输入通道，打开生理信号采集系统，选择“蛙心灌流”实验， 调节好零点。 4、实验观察： （1）记录正常心搏曲线。 （2）向套管内滴加 2 滴 5%NaCl 溶液，并做好加药标记，观察心搏曲线变化， 待曲线出现明显变化时， 立即吸取套管中的灌流液， 并做好冲洗标记， 迅速用新 鲜任氏液清洗多次，待心搏恢复正常。 注意：在换液时切勿碰套管，并使液 体贴壁流下，以免操作影响曲线的基线，同时保持灌流液面一致。 （3）同法向管内滴加 2 滴 CaCl2 溶液，做好加药标记，观察记录心搏曲线的变 化，同法冲洗更换灌流液，待心搏恢复正常。 （4）同法向管内滴加 1 滴 KCl 溶液，做好加药标记， 观察记录心搏曲线的变化， 同法冲洗更换灌流液，待心搏恢复正常。 五：实验结果与分析 1、正常的心搏曲线 +溶液时，心跳显著减弱。 2、滴加 Na 2+浓度有很高的依赖性， 因其是触发心 因为心肌细胞的收缩相对细胞外的 Ca 2+的关键，当在任氏液中滴加 NaCl 时，Na+与 Ca2 内流的竞争性抑 肌质网释放 Ca 2 制导致 Ca 内流减少，心肌的收缩活动也随之减弱。 开始清洗后心脏恢复约 25s 回归正常。 3、 2+ 用高 Ca 任氏液灌流，可见蟾蜍心脏收缩力增强， 但舒张不完全， 收缩基线上移。 2+浓度的高低有关，当 Ca2+浓度升至 理论知，心肌的舒缩活