《电离辐射对染色体》-精选课件(公开).pptVIP

第三章  电离辐射对染色体的作用 第五节 生物剂量测定 一、生物剂量计 1、生物剂量测定（biological dosimetry） 用生物方法对受照个体的吸收剂量进行测定 2、生物剂量计 将用来估算受照剂量的生物学体系与照射剂量间呈良好量效关系的生物体系称为生物剂量计 二、生物剂量测定 全身剂量当量或全身等效剂量（equivalent whole body dose) 在事故照射情况下，采取受照人员的血液，按建立剂量－效应曲线的同样标准进行细胞培养、标本制备和畸变分析，检出受照人员血样的染色体畸变率。然后选择相近的剂量－效应曲线，估算相应的吸收剂量值 要求 1、给出平均值，同时给出95%可信限剂量范围 95％可信限范围＝畸变数/细胞数±SP（观察细胞畸变率的标准误）×1.96 2、分析细胞数要符合统计学要求 3、分析畸变的类型 双着＋环 48小时内，小于6～8周 4、染色体畸变估算剂量范围 0.1～5Gy 5、分布比较均匀的全身照射 三、常见的其他生物剂量测定方法 1、早熟凝集染色体（PCC)分析 （1）PCC（premature chromosome condensation）：分裂中期的细胞和间期细胞进行融合，间期细胞核被诱导提前进入有丝分裂期，间期核由分散状态浓缩成染色体样结构（早熟凝聚染色体，PCC），光镜下可见诱导细胞的中期染色体和纤细的单股PCC 优点： 1、可直接观察间期细胞损伤染色体，不需要刺激和细胞培养，减少了由于间期细胞死亡及染色体修复等带来的误差。 2、时间短，2～3小时 3、样本量少，0.5ml；分析细胞数量少，100个 缺点： 干扰细胞融合的因素较多，主要是技术问题 2、CB法微核分析 微核（micronuclear）：在诱变剂作用下，断裂残留的无着丝粒断片（染色体片）或在分裂后期落后的整条染色体，在分裂末期都不可能纳入主核。在进入下一次细胞周期的间期时，它们在细胞内浓缩为小的核，一般小于主核的1/3，着色与主核相同或略浅。 胞浆分裂阻滞微核法（cytokinesis-block method,CB法）： 在培养基中加入松胞素－B（不干扰细胞核分裂的同时阻滞胞浆的分裂）；分裂一次的所有淋巴细胞的胞浆中将出现两个细胞核，这种双核细胞 称为CB细胞 计数CB细胞中的微核率。 特点： 微核仅出现在诱发后经过一次分裂的间期细胞中 微核于照后立即升高，衰减速度比双着快 CB法灵敏、准确，与剂量成正比，剂量范围:0.25～5.0Gy 适用范围：急性均匀或比较均匀的全身照射 正常值1～2％；与年龄呈正相关，性别无关 3、稳定性染色体畸变（易位）分析 （1）荧光原位杂交（fluorescence in site hybridization,FISH)技术 原理：荧光＋生物素＋已知碱基序列的核酸探针 依据：照射剂量与易位。双着有良好的量－效关系 位置：1）双着丝粒：泛着丝粒探针着丝粒区着色 2）易位：（1）采用染色体区域的重复序列；（2）一条或数条全染色体 4、HPRT（次黄嘌呤尿嘌呤磷酸核糖基转移酶）基因位点突变分析 位于X染色体（Xq27） HPRT是细胞体内嘌呤核甘酸生物合成的一条补救途径 体细胞HPRT基因对电离辐射和化学诱变剂都非常敏感 体细胞突变研究中最常用的基因 适用于急性和慢性小剂量照射 缺点：自发率较高，与年龄有关 第六节 低水平辐射诱导的细胞遗传学适应性反应 辐射兴奋效应（radiation hormesis): Luckey(1980)著书：“所有核辐射都有害码？” 低剂量电离辐射对生物生长发育、营养物质的利用、抗感染以及抗肿瘤等方面具有有益作用 一、适应性反应 适应性反应（adaptive response,AR): 先低水平辐射 继高剂量辐射 损伤减轻 适应性照射：首次低水平辐射 攻击性照射：第二次较大剂量的辐射 适应性反应的普遍性 1)低剂量全身照射 实验动物接受一次(急性)或慢性低剂量全身照射，可诱发淋巴细胞、骨髓细胞、生殖细胞等产生适应性反应。 人体受到极低剂量率辐射长期作用，是否会产生类似的结果，目前这方面的资料还很少。 2）离体照射 低剂量辐射离体条件下细胞，同样也产生适应性反应。 预先用低剂量x射线或Y射线照射细胞，或使细胞在含低浓度3H—TdR的培养液中处理(诱导照射/D1)，一定时间之后，给予大剂量照射(攻击性照射/D2)，然后检测和比较经低剂量预照射的细胞与末受低剂量预照射细胞的染色体畸变率。大量的实验研究证实，一定剂量范围内的电离辐射能诱导包括人外周血淋巴细胞的