牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化….docVIP

牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化… ????本实验表达的His-FimA融合蛋白主要用于后续实验获得免疫血清和多克隆抗体，因此需求量较大，而且不用考虑靶蛋白是否具有活性。本实验所表达的His-FimA融合蛋白主要位于包涵体中，这种以包涵体形式表达的蛋白很稳定，不易被降解。这样在下一步实验纯化FimA蛋 ???? ???? 　　 　　本实验表达的His-FimA融合蛋白主要用于后续实验获得免疫血清和多克隆抗体，因此需求量较大，而且不用考虑靶蛋白是否具有活性。本实验所表达的His-FimA融合蛋白主要位于包涵体中，这种以包涵体形式表达的蛋白很稳定，不易被降解。这样在下一步实验纯化FimA蛋白时，可以在变性条件（使用变性剂8M尿素或者6M的胍盐酸）下溶解包涵体，以便于使用Co2+柱亲和层析得到纯化的靶蛋白。 　　本实验所使用的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS所带pLysS具有氯霉素抗性。在将重组质粒和空质粒转化入宿主菌时，不需要使用IPTG进行蓝白筛选，因为pET-15b Vector 含有氨苄青霉素抗性基因，转化了重组质粒和空质粒的BL21(DE3)pLysS同时具有氯霉素和氨苄青霉素抗性，而未转化的菌珠只有氯霉素抗性，这样就可以使用氨苄青霉素来对转化菌进行筛选。 　　本实验用本课题组前期构建的fimA基因的原核表达质粒pET-15b-fimA