何水林版基因工程基因操作过程教学版.pptxVIP

转化子的筛选和鉴定（检）;第一节　DNA的体外重组;亚克隆：把DNA片段从某一类型的载体无性克隆繁殖支另一类型的载体的过程。;理想的酶切位点应当符合下列几个条件; 外源DNA与载体的连接方法;1　黏性末端连接法;同种内切酶生产的粘性末端的连接;同尾酶生产的粘性末端的连接;单酶切位点黏性末端连接法的缺点;双酶切片段的定向克隆;双酶切片段的定向克隆的优点;不同粘性末端的连接;从分子动力学的角度讲，由限制性核酸内切酶创造的粘性末端的连接属于分子内部的连接，而平头末端的连接则属于分子间的连接，因此后者反应速度要慢得多 提高平头末端连接效率的方法包括： ;平末端的连接的优点;3　人工接头连接法;粘性末端的更换;4　同聚物加尾(homopolymer tails joining)连接法;人工粘性末端的连接 5′突出末端;人工粘性末端的连接 3′突出末端;人工粘性末端的连接 平头末端;同聚物接尾法实际上是一种人工粘性末端连接法 主要优点;5　重组率;提高重组率的方法;提高重组率的方法;第二节　重组体导入;1 用于基因转移的受体菌或细胞;1.1　受体细胞应具备的条件;1.2　各种基因工程受体的特性;枯草杆菌;链霉菌;酵母菌;昆虫细胞（家蚕）;哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞 CHO） ;植物细胞（拟南芥、烟叶） ;;拟南芥是进行遗传学研究的好材料 被科学家誉为“植物中的果蝇”;1.