动物细胞工程制药.pptxVIP

;;第二节 动物细胞的形态和生理特点;;;⒉悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。 ⒊兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物，既可以贴附于支持物表面生长，但在一定条件下，他们还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。;二、动物细胞的化学组成和代谢;三、动物细胞的生理特点;;;;;;;;;第三节 生产用动物细胞的要求和获得;二、生产用动物细胞的获得;;二倍体细胞有正常细胞的特点： ①染色体组型是2n核型； ②贴壁依赖接触抑制； ③可传代培养50代，寿命有限； ④无致瘤性。 ;;4.融合细胞系 指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的特点，并获得了无限增殖的能力。 (1)仙台病毒融合法 (2)聚乙二醇融合法 (3)电融合法 5.重组工程细胞系;三、基因工程细胞的构建和筛选;; 例：采用物理、化学方法使受体细胞膜产生局部破损或缺陷，被动吸纳外源DNA片段。 (1)电穿孔法。将受体细胞置于脉冲电场中，可以使细胞膜产生短暂的(?30nm)左右的微孔，吸收DNA片段。 (2)基因枪。将DNA片段(载体)包在钨或金微粒表面(?1-3μm)，用静电或火药爆炸等驱动微粒射入受体。 (3)微注射/显微注射。显微镜下用注射器将DNA片段注入受体细胞(动物受精卵)。?：0.5-10μm尖头玻璃管。 (4)化学法。如PEG(聚乙二醇)可以刺激原生质体产生吸收DNA片段。 常用PEG与电穿孔法结合，提高外源DNA的吸收率。;b.筛选 DNA重组体的筛选与鉴定;基因工程技术策略;第四节、动物细胞的培养条件和培养基;;;;;;二、动物细胞的培养基的种类和组成;;;;;;第五节 动物细胞培养的基本方法;一、 细胞分离;二 、细胞计数;三、 细胞传代;四、 细胞的冻存和复苏;第六节 动物细胞大量培养的方法和操作方式;;二、动物细胞培养的操作方式;第七节 动物细胞生物反应器及其检测控制系统;⒈搅拌式生物反应器;⒉气升式生物反应器 ⒊中空纤维式生物反应器平床式中空纤维式生物反应器⒋透析袋或膜式生物反应器 ⒌固定床或流化床式生物反应器;CellGen plus生物反应器;二、动物细胞生物反应器的检测控制系统;⒉主要参数的检测??控制方法;一 动物细胞产品的常用纯化方法 1. 离心 2. 离子交换层析 3. 凝胶过滤 4. 亲和层析 5. 盐析和有机溶剂沉淀 6. 透析 7. 高压液相层析;二 动物细胞产品的质量要求 1. 对工程细胞的要求 2. 对生产工艺的要求 3. 对产品的质量要求;一 类淋巴细胞干扰素 二 组织型纤溶酶原激活剂 三 单链尿型纤溶酶原激活剂 四 促红细胞生成素 五 凝血因子Ⅷ;第十节 动物细胞制药的前景与展望;一、提高产量、降低成本和改进质量方面的研究;二、转基因动物的研究;三、组织工程的研究