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情境六：微生物检测技术 任务三：酵母菌、霉菌测定 知识点：酵母菌、霉菌测定步骤 课程：微生物检验技术 酵母菌、霉菌测定步骤 1. 固体和半固体样品稀释 称取25g样品，加入225 mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液），充分振荡，或用拍击式均质器拍打1 min～2min，制成1:10 的样品匀液。 一、样品稀释 2.液体样品稀释 以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min～2min，制成1:10 的样品匀液。 一、样品稀释 3.梯度稀释 取1 mL 1:10 样品匀液注入含有9 mL 无菌稀释液的试管中，另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸，或在漩涡混合器上混匀，此液为1:100 的样品匀液。 按上述操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 一、样品稀释 根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的马铃薯葡萄糖琼脂孟加拉红琼脂（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固。 二、倒平板 琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养5d，观察并记录培养至第5d的结果。 三、培养 28℃±1℃培养5d （1）肉眼观察，必要时可用放大镜或低倍镜，记录稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌落数。以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。 （2）选取菌落数在10 CFU～150 CFU 的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延。 四、菌落计数
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