《高效毛细管电泳及其应用-》-精选课件(公开).pptVIP

SO3- SO3- SO3- SO3- SO3- SO3- SO3- SO3- * * 在MECC的系统中存在两个相： 流动的水相和起到固定相作用的 胶束相，被分离物在这两个相之 间分配，由于它们在胶束中具有 保留能力而产生不同的保留时间。 * * MECC的优点： 1、极高的分离效率。5万—50万 理论塔板数/m。 2、分离速度快。一般20分钟左右。 3、可分离中性化合物。 * * （3）毛细管凝胶电泳（capillary gel electrophoresis ，CGE） 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减 小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段。 特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。 （4）毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing，CIEF） a、根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； b、 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； c、 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零； * * d、聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满 足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离； e、 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液； f、 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测 g、电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。 （5）毛细管等速电泳（capillary isotachophoresis ，CITP） 图 15 毛细管等速电泳示意图 a、 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 b、 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。 * * c、不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4? ? ? ?电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队； d、特点：界面明显，富集、浓缩作用； （6）阵列毛细管电泳（Capillary Array Electrophoresis, CAE) CAE是满足人类基因组计划和蛋白组计划分析大批量样品的要求产生的。与传统聚丙稀酰胺凝胶板可以进行多道平行分析相似，毛细管阵列电泳就是采用多根毛细管组成的阵列进行多道分析的一种分离模式。 （7）毛细管电色谱（ capillary electroosmotic chromatography ，CEC） 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程。 * * （一）应用 1、离子分析（analysis of ion） 阳离子分析 迁移方向和电渗流方 向一致； 4.5min内分离了24种金属离子； 阳极进样，阴极检测； 具有很高的灵敏度； 图 16 阳离子分离毛细管电泳图 五、高效毛细管电泳应用与进展 * * 阴离子分析 阴离子电泳方向和电渗流方向相反、速度接近，分析时间长、效率低； 质量小、电荷密度大的离子如：SO4-2、Cl-、F-等，电泳速率大于电渗流，阳极端流出，在阴极端无法检测；加入电渗流改性剂，十六烷基三甲基溴化胺等，使电泳方向和电渗流方向一致，可在3.1min内分离36种阴离子；阴极进样，阳极检测； 离子价态及存在形态分析 图 17 阴离子毛细管分离图 * * 2、药物分析(analysis of pharmaceutics) 检测体液或细胞中某些代谢产物的分析； 尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段； 采用毛细管区带