水中总大肠菌群的测定.pptVIP

* 水中总大肠菌群的测定 主讲教师 王福红 水中总大肠菌群的测定 检验依据：GB/T5750.12-2006 方法：多管发酵法 总大肠菌群 总大肠菌群 37℃、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢杆菌 粪大肠菌群（耐热--） 总大肠菌群 非粪大肠菌群 EC肉汤 44.5士0.5℃ 总大肠菌群 MPN （most probable number） 最可能数或最近似数 总大肠菌群MPN 100mL水样中所含的总大肠菌群的最近似数或最可能数 指示菌（总大肠菌群） 指示菌应具有的条件 和肠道致病菌的来源相同 在外界环境中的生存时间长 检验方法比较简便 实验目标 掌握生活饮用水总大肠菌群的测定方法 掌握水源水总大肠菌群的测定方法 判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量 实验内容 1 乳糖发酵试验 4 证实试验 5 结果分析与报告 1 培养基制备 2 乳糖发酵试验 3 分离培养 实验器材 水样 生活饮用水、水源水 培养基 乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基 试剂 革兰氏染色液、稀释剂等 实验器材 其他 无菌工作台、酒精灯、稀释液、灭菌吸管、灭菌试管、小倒管、试管架、接种环、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油、平皿、天平、电炉等 培养基制备 乳糖发酵管 双料管 单料管 伊红美兰平板 放置小倒管并排气 检验程序 生活饮用水接种 乳糖发酵试验 分离培养 证实试验 结果报告 水源水稀释与接种 一、乳糖发酵（初发酵）试验 自来水 直接接种10mL水样于双料培养基，每个水样共接种5管 水源水 加大稀释度，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管 各10ml 1ml 各1ml 水样 1:10稀释水 各1ml 乳糖发酵试验 一、乳糖发酵（初发酵）试验 培养 36℃士l℃ 24h士2h 观察产酸产气情况 不产酸产气 产酸产气 第二天 二、分离培养 产酸产气的发酵管分别转种EMB平板（分区划线） 36℃士l℃ 24h士2h 第三天 三、证实试验（复发酵试验） 观察EMB平板菌落形态 深紫黑色、具有金属光泽的菌落 紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落 淡紫红色、中心较深的菌落 一半进行涂片、染色、镜检 另一半进行接种 （证实试验用） 三、证实试验（复发酵试验） 只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌才接种乳糖蛋白胨管 36℃士l℃ 24h士2h 第四天 四、结果报告 观察乳糖发酵管产气情况 产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在 查MPN 检索表 根据证实为总大肠菌群阳性的管数 报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN） 四、结果报告 5管法结果见表1，15管法结果见表2 四、结果报告 表1 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN ) 5个10mL管中阳性管数 最可能数（MPN） 0 2.2 1 2.2 2 5.1 3 9.2 4 16.0 5 16.0 四、结果报告 表2 总大肠菌群MPN检索表(部分） （总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份0.1mL水样） 接种量/ mL 总大肠菌群/(MPN/100mL) 接种量/ mL 总大肠菌群/(MPN/100mL) 10ml管 1ml管 0.1ml管 10ml管 1ml管 0.1ml管 0 0 0 2 1 0 0 2 0 0 1 2 1 0 1 4 0 0 2 4 1 0 2 6 0 0 3 5 1 0 3 8 0 0 4 7 1 0 4 10 0 0 5 9 1 0 5 12 四、结果报告 稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数 表2采用3个稀释度（10mL、1mL 和0.1mL),每个稀释度5管 表2内所列接种量如改用100mL、10mL和1mL时，表内数字应相应降低10倍；如改为1mL、0.1mL和 0.01mL时,则表内数字应相应增加10倍。其余可类推。 四、结果报告 所有乳糖发酵管均阴性，可报告总大肠菌群未检出。 注意事项 1.无菌操作。 2.每递增稀释一次，即换一支1mL灭菌吸管。 3.培养基使用前应先检查培养基内小倒管中有无气泡。 4.接种量在1ml及以下时用单料培养基，接种量超过1ml时用双料培养基。 5.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15min。 习题作业 1.判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染程度时，常用总大肠菌群作为指示菌来表示，该指示菌应具备的条件有哪些。 2.总大肠菌群和粪大肠菌群有什么区别？如何区分粪大肠菌群和非粪大肠菌群。 习题作业 3.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15min，为什